首页> 中文会议>第5届全国疑难及重症肝病大会 >肝细胞生长因子的浓度和每日作用时间对诱导人骨髓间充质干细胞分化表达白蛋白的影响

肝细胞生长因子的浓度和每日作用时间对诱导人骨髓间充质干细胞分化表达白蛋白的影响

摘要

目的:骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MMSCs)是骨髓中中胚层来源的具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞,在一定条件下可被诱导横向分化为肝细胞,临床可用于治疗终末期肝病。目前的研究大多是用包括肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)在内的多种细胞因子联合在体外持续诱导MMSCs向肝细胞分化,而对单独HGF非连续诱导MMSCs向肝细胞分化的条件探讨尚未见报道。本研究将HGF浓度和每日作用时间作为两个影响因素进行不同水平组合来诱导人MMSCs向肝细胞方向分化,通过检测肝细胞标志蛋白——白蛋白的mRNA表达量来评价诱导分化效果,以期为HGF的实际临床应用提供参考。rn 方法:以成人骨髓为材料,采用密度梯度离心结合贴壁培养分离纯化MMSCs,用流式细胞仪鉴定细胞表型。以含10%胎牛血清的L-DMEM作为基础培养基,加入HGF作为诱导因子进行体外培养。将HGF浓度和每日作用时间作为两个影响因素进行不同水平组合诱导MMSCs至第21d,采用荧光定量RT-PCR检测诱导分化细胞白蛋白mRNA的相对表达量。rn 结果:HGF浓度≥20ng/ml且每日作用时间≥6h以上的诱导组均可见不同水平的白蛋白mRNA表达,且白蛋白mRNA表达量与HGF浓度和每日诱导时间呈正相关。其余诱导组和未诱导对照组均未见白蛋白mRNA表达。rn 结论:HGF单独作用能够诱导MMSCs向肝细胞方向分化;HGF浓度以不低于20ng/ml为宜,HGF每日诱导时间以不少于6h为宜,诱导效果呈HGF浓度和每日作用时间正向依赖性。

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