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HIV-1 Tat蛋白可以影响RON蛋白的表达和其磷酸化水平

摘要

目的:探讨HIV Tat蛋白对RON蛋白表达及其磷酸化的影响,并进一步深入了解HIV Tat影响RON表达及其磷酸化的主要信号通路.方法:构建PeDNA3.1(+)/Tat并转染293T细胞,有限稀释法获得稳定表达Tat的细胞株,提取纯化HIV Tat蛋白,同样的方法构建PDR2/RON质粒,转染获得稳定表达RON蛋白的293T/RON细胞,用免疫荧光和免疫共沉淀的方法测定293T/RON细胞的RON的表达及磷酸化的水平.分别以HIV完整病毒、HIV-1 Tat蛋白500ng/ml,1000ng/ml刺激293T/RON细胞,光镜下观察细胞形态改变,免疫荧光和免疫共沉淀的方法测定293T/RON细胞的RON的表达及磷酸化的水平.实验中以293T细胞作为阴性对照,MSP刺激293T/RON细胞作为阳性对照.另外,以H9/HTLv7-ⅢB与293/RON共培养,观察病毒复制的改变情况。结果:HIV Tat蛋白能降低RON的表达并明显上调RON的磷酸化,以1000ug/ml为最佳浓度,结果表明,提示HIV-1 Tat蛋白可以降低RON蛋白的表达上调RON的磷酸化,从而影响RON的生物学活性,这种机制可能可以解释肿瘤在艾滋病病人高发的原因。

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