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高加索三叶草、白三叶及其杂交后代F1 的RAPD 分析

摘要

三叶草属(Trifolium L.)植物属一年生或多年生草本,具有根系发达、固氮能力强、营养丰富、适口性好及建植迅速等特点,被世界各地广泛地用作反刍动物的饲料和草坪地被植物。高加索三叶草(T.ambiguum Bieb.,2n=6x=48)是多年生长寿命草种,具有很强的抗寒和抗旱特性。近些年来,国外大多数国家对该三叶草进行了一系列适应性和利用价值研究,认为高加索三叶草是唯一可以在干旱、寒冷地区种植的三叶草品种。白三叶(T.repens L.,2n=4x=32)是世界上利用广泛的优良饲草,多年生、匍匐生长、主根短、侧根多,具有固氮能力强、耐阴、耐践踏及高观赏价值等特点。高加索三叶草和白三叶都是三叶草属重要的种质资源。但是高加索三叶草固氮能力差,需要特殊的根瘤菌,与三叶草属其它种的根瘤菌不能互接;而白三叶根系浅、喜湿,种植时或由于冬春季节少雪而易受寒流侵害,或由于生长季地表干燥,而使其不定根难以发育,造成成片死亡现象,至今不能推广应用。然而研究表明,高加索三叶草与白三叶具有相同的染色体基数(8),在遗传学上是有亲缘关系的两个种。为了获得结合了高加索三叶草和白三叶的优点、克服了各自的不足的优良种质资源,通过杂交胚离体培养技术获得了杂种F1 植株。进一步研究发现,杂种F1 体细胞染色体的数目为40 条,是双亲染色体数目总和的一半,为五倍体(2n=5x=40)。RAPD 即随机扩增多态性DNA,是20 世纪90 年代初发展起来的一项分子标记技术。它以聚合酶链式反应(PCR)为基础,以随机排列的寡聚脱氧核昔酸为引物(通常长度为10 个碱基)对模板DNA 进行扩增,所产生的不连续产物经染色后即可鉴定多态性。RAPD 标记技术以其模板用量少、引物无种属特异性、操作简单快捷等优点已被广泛用于植物遗传多样性分析、种质资源评价、远缘杂种鉴定等方面。本试验拟对高加索三叶草、白三叶及其杂种F1 进行RAPD 遗传差异性进行研究,从50 个随机引物中筛选出14 个适宜引物,共扩增出181 个RAPD 位点,多态性位点百分率为74.0%,每个引物扩增的条带数平均为3.8 ~4.8 ,DNA 片段长度在100 ~2000 bp 之间。研究发现,高加索三叶草与白三叶的遗传距离较远,为0.6337 ;杂种F1 与父本白三叶的遗传距离为0.6535 ;而与母本高加索三叶草的遗传距离则相对较近,为0.4158 ,说明杂种F1 更偏向其母本.该结果可为其杂交后代育性恢复、选育利用及种质资源评价提供依据。

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