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家蚕脱氧羟腐胺赖氨酸合酶基因BMDHS和脱氧羟腐胺赖氨酸羟化酶基因BMDOHH的克隆与表达研究

摘要

脱氧羟腐胺赖氨酸合酶和脱氧羟腐胺赖氨酸羟化酶是催化真核翻译起始因子序列中羟腐胺赖氨酸合成的两个酶。羟腐胺赖氨酸的合成是真核翻译起始因子活化成熟的标志,对真核细胞的存活及增殖具有重要作用。本文利用生物信息学、RACE和RT-PCR等方法克隆了家蚕脱氧羟腐胺赖氨酸合酶和脱氧羟腐胺赖氨酸羟化酶的同源基因BmDHS和BmDOHH,分析了基因结构和表达谱。BmDHS和BmDOHH的cDNA全长分别为1311 bp和1874 bp。BmDHS只有一个外显子,没有内含子,包含最大ORF框为1116 bp,编码371个氨基酸,分子量为41.11 KD,等电点为5.84。BmDOHH由4个外显子和3个内含子构成,包含最大ORF框为915 bp,编码304个氨基酸,分子量为34.30 kD,等电点为4.86。BmDHS编码的蛋白质在47-361氨基酸残基位置为脱氧羟腐胺赖氨酸合酶的保守区域;BmDOHH编码的蛋白质分别在23-52,54-83,87-116,177-206,208-237,241-270氨基酸残基位置存在E-Z type HEAT重复区。BmDHS和BmDOHH所编码的蛋白质与人、果蝇等生物均具有55%以上的蛋白质同源性,保守区域高度一致。系统发育树分析结果显示DHS和DOHH在进化上存在物种特异性。表达谱分析表BmDHS和BmDOHH在所调查的组织中均没有组织和时空特异性。

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