松材线虫两种实用分子检测技术

摘要

本文采用松材线虫SCAR标记检测方法与实时PCR检测方法对7个线虫未知样品以及1个松材线虫样品、1个拟松材线虫样品和1个大核滑刃线虫样本进行检测,同时对7个线虫未知样品进行形态鉴定。形态鉴定结果表明:7个未知线虫样品中,2、4、7号样品为松材线虫样品, 3号样品中除松材线虫外还含有其他线虫。1、5、6等3个样品不含松材线虫;SCAR标记检测结果为:2、3、4、7等4个样品与8号松材线虫样品出现了一条清晰、明亮的860bp特异条带,表明2、3、4、7号四个待测样品中含有松材线虫。1、5、6号样品与9号拟松材线虫、10号大核伞滑刃线虫均未出现扩增谱带,表明1、5、6三个待测样品中不含有松材线虫;实时PCR检测结果为:2、3、4、7样品与8号松材线虫样品表现有明显的阳性扩增信号,表明2、3、4、7号4个待测样品中含有松材线虫。1、5、6号样品与9号拟松材线虫、10号大核伞滑刃线虫均未出现扩增信号,无CT值,表明1、5、6三个待测样品中不含有松材线虫。对于松材线虫的检测,两种分子检测结果与形态鉴定结果完全一致。实验表明,SCAR标记检测方法以及实时PCR检测方法对松材线虫具有很强的特异性。采用这两种分子检测方法都可以在较短时间内对松材线虫进行鉴定,其中SCAR标记检测方法约需2小时,实时PCR检测方法约需1小时。实现了对松材线虫幼虫快速检测目标,检测结果便于判读。这两种分子检测方法都适合于生产上应用。

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