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大肠杆菌基受态细胞制备方法的优选

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以大肠杆菌OH5a、JM109为受体菌，质粒DNA加入感受态细胞，经短暂冰浴和热休克后，直接涂布预热至37℃的平板或加入LB培养基，复活一定时间后涂板。研究不同型号的菌株、不同转化溶液、感受态细胞的存放时间、转化时间及转化后的复苏时间等对质粒转化效率的影响。结果表明：以0.10mol/L,CaSO4溶液制备感受态细胞，冰浴转化30min，经42℃热休克，作用90s后，不复苏直接用无菌水进行8倍稀释，涂平板筛选转化子，可获得较好的转化效率，每微克(μ g)质粒DNA可以得到高达105个转化菌落。转化溶液浓度和感受态细胞的存放时间对转化效率有明显的影响，而转化时间、冰浴时间和转化后的振荡培养复苏时间对转化效率的影响不明显。

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来源
《第二届中国资源生物技术与糖工程学术研讨会》|2007年|98-103|共6页
会议地点威海
作者
温建新; 周顺; 黄保远; 董霜; 任慧英; 刘文华; 邹玲; 李迎军; 王金宝;
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作者单位

中国微生物学会;

山东大学微生物技术国家重点实验室;

山东学微生物学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类肠细菌;基因的重组;
关键词
大肠杆菌; 感受态细胞; 质粒转化; 转化效率;

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