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突变型乙肝病毒前C-C基因疫苗的构建表达及免疫效果研究

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目的：对重组乙肝VR1012/EHNⅡ/前C-C基因疫苗(VEC)中的蛋白酶切位点进行点突变,并通过动物试验研究突变型前C-C基因疫苗的免疫效果。方法采用单引物二次PCR法对质粒VEC依次进行基因点突变,得到151+154(VE2)、151+154+164+167点突变(VE4)2种突变型疫苗,转染HepG2细胞并免疫Balb/c小鼠。通过细胞免疫化学、酶联免疫分析、免疫印迹、酶免疫斑点、细胞杀伤试验等方法检测其在HepG2细胞内的表达和诱导小鼠特异性体液、细胞免疫的情况。同时联合小鼠γ干扰素基因疫苗(Vγ)免疫小鼠,研究免疫效果。结果 VEC、VE2、VE4转染HepG2细胞9后均胞浆表达目的蛋白,产物分子量分别为P18、P20、P22左右,细胞裂解液HBeAg含量VE4、VE2N高于VEC,上清中则反之; 疫BALB/C小鼠,证实3种质粒均能引发特异性细胞免疫反应,VE4、VE2强于VEC;联合Vγ后特异性细胞免疫增强。结论突变型前C-C基因疫苗可在真核细胞表达目的蛋白且免疫效果优于突变前。γ干扰素基因可作为基因佐剂增强HBVDNA疫苗诱导的特异性细胞免疫反应。

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来源
《第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会》|2007年|932-938|共7页
会议地点南京
作者
张敏; 辛绍杰; 胡燕; 候俊; 沈宏辉; 王志杰; 孔维; 貌盼勇;
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作者单位

中华预防医学会;

中华医学会微生物学与免疫学分会;

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会议组织
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原文格式 PDF
中图分类
关键词
乙型肝炎; DNA疫苗; 点突变; Pre-C抗原; 增强子Ⅱ;

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