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不同类型的转基因细胞为核供体生产猪的转绿色荧光蛋白基因克隆胚胎

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本研究首先建立了近交系五指山小型猪(WZSP )胎儿成纤维细胞系((FF),新生猪骨髓间充质细胞(MSCs)系和成年猪前脂肪细胞系(PreA )。采用组织块法建立胎儿((27日龄)成纤维细胞系;髓间充质细胞从新生猪后腿骨冲取骨髓，加人到Percoll分离液中离心，吸取中间界层面细胞，贴壁法培养骨髓间充质原代细胞，培养基为低糖DMEM。对间充质细胞向脂肪细胞进行诱导分化，油红O染色鉴定;前脂肪细胞从猪的皮下脂肪取样，用0.1﹪胶原酶消化法建立前脂肪细胞原代细胞，并对前脂肪细胞进行诱导分化为成熟的脂肪细胞，油红O染色鉴定。为了获得转基因细胞系，利用脂质体lipofectamine<'tm>2000 (Invitrogene)介导的方法将质粒pEGFP-N1转染了胎儿成纤维细胞、骨髓间充质细胞和前脂肪细胞，经过800μg/mL G418筛选后均获得了阳性细胞株。

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来源
《中国农业生物技术学会动物生物技术分会第二届全国动物生物技术学术研讨会》|2006年|182-183|共2页
会议地点南宁
作者
潘登科; 牟玉莲; 潘求真; 万荣; 刘吉; 张莉; 冯书堂;
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作者单位

广西畜牧兽医学会;

中国畜牧兽医学会;

中国农业生物技术学会;

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正文语种
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中图分类繁殖生物技术;
关键词
猪; 繁殖技术; 体细胞核移植; 绿色荧光蛋白; 转基因; 囊胚;

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