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不同规格的细胞培养板在细胞毒性检测中误差比较

摘要

目的:生物医用材料及制品已被大量应用于临床各个学科,其安全性问题已越来越受到重视.在众多的生物相容性试验中,细胞毒性试验以其简便、快捷、灵敏性高、节省动物等优点被列为首选试验项目,作为评价材料毒性的重要指标.细胞毒性试验是一种在离体状态下模拟生物生长环境检测生物医用材料及制品或其浸提液对细胞溶解、死亡、抑制细胞生长和其他毒性的作用方法.在细胞毒性试验中人们通常会将细胞接种于96孔或24孔培养板中,进而通过材料的浸提液与培养的细胞广泛接触,分析材料中各组成成分及其浓度对细胞的毒性影响.本次试验对以上两种规格培养板对同种材料检测所得到的板间误差、板内误差结果进行分析,为医疗器械、生物材料进行体外细胞毒性检测选择合适规格的培养版、减少检测系统误差、保证检测结果可靠性提供一定的依据.rn 方法:选取小鼠成纤维细胞L-929,传代2-3次后将其配制成浓度为l×104个/ml和1×105个/ml的细胞悬液分别接种子96孔培养板和24孔培养板中,接种体积分别为100μ1和500μl。置37±2℃,5%C02培养箱中培养,24-48小时后细胞生长占孔面积约80%左右,置显徽镜下观察细胞形态,拍照,弃去原培养液。空白对照组(C组)加入新鲜细胞培养液;阴性对照组(CN组)加入市售一次性无菌注射器管壁部分浸提液;阳性对照组(CP组)加入体积分数为5%的DMSO新鲜细胞培养液,置C02培养箱继续培养,于更换培养液后的24、48和72h,置显徽镜下观察细胞形态,并拍照。rn 结果:96孔细胞培养板各板内所测得OD值的相对标准偏差分别为:C组9.35%和4.66%,CP组7.82%和4.81%,CN组7.01%和6.28%; 24孔细胞培养板各板内所测得OD值的相对标准偏差分别为。C组5.47%和9.62%; CP组6.29%和3.56%:CN组5.14%和3.6l%。rn 结论:24孔细胞培养板的板内重复性要优于96孔细胞培养板,其原因可能是由于其单个孔内的细胞基数以及添加的试剂体积多于96孔细胞培养板,因而由操作造成的相对误差因较96孔板小,因此当样品数量少较少时建议使用24孔培养板,其板内重复性和板间误差要稍优于96孔板。

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