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农杆菌介导的黄瓜炭疽菌遗传转化

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本文建立并优化了农杆菌介导转化瓜类炭疽菌获得T-DNA插入突变体的体系,包括农杆菌使用浓度、农杆菌与炭疽菌孢子共培养时间、抗生素配合使用抑制农杆菌污染等.所用的转化载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP除了抗生素选择标记外还携带有融合GFP-GUS报告基因.转化106个孢子平均可获得约150～200个潮霉素抗性转化子.PCR检测表明,所有潮霉素抗性转化子菌株都能从其基因组DNA中扩增到转化载体中的GUS基因片段,而且都能产生GFP荧光或GUS染色阳性.转化子菌株经过连续继代培养后仍然稳定.随机对36转化子菌株进行致病性测定,发现1个转化子菌株对黄瓜致病性下降,1个丧失致病性,而大多数表现为野生型致病性.农杆菌介导转化瓜类炭疽菌体系的建立,为进一步构建大库容量的T-DNA插入突变体库、致病性突变体筛选以及致病性相关基因的克隆鉴定奠定了基础.

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来源
《2005年华东植物病理学术研讨会》|2005年|44-54|共11页
会议地点浙江绍兴
作者
方丽; 宋凤鸣;
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作者单位

浙江省植物病理学会;

中国植物病理学会;

江苏省植物病理学会;

上海市植物病理学会;

福建省植物病理学会;

安徽省植物病理学会;

江西省植物病理学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类病害;植物病理学;
关键词
黄瓜炭疽病菌; 遗传转化; T-DNA插入突变; 农杆菌介导;

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