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运用微电子细胞芯片技术筛选肥大细胞脱颗粒相关激酶和磷酸酶分子

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目的:利用微电子细胞芯片技术在体外实时、无标记、高通量地检测肥大细胞脱颗粒过程,在此基础上,运用蛋白激酶和磷酸酶小分子抑制剂文库筛选出在IgE介导的肥大细胞脱颗粒过程中的关键激酶或磷酸酶分子,更好地理解肥大细胞脱颗粒的过程.rn 方法:1、用微电子细胞芯片技术建立IgE介导的肥大细胞脱颗粒时间响应图谱；2、经典方法验证图谱与肥大细胞脱颗粒过程的一致性:①肥大细胞脱颗粒标记物β-氨基己糖苷酶活性变化②激光共聚焦荧光显微镜观察肥大细胞脱颗粒过程中肌动蛋白骨架变化；3、运用微电子细胞芯片技术和实验室现有的激酶和磷酸酶小分子抑制剂文库,筛选出新的作用靶点；4、选择新靶点的小分子抑制剂，在细胞和动物水平上分别验证抑制剂对肥大细胞脱颗粒的抑制作用。rn 结果:RBL-2H3细胞在用IgE致敏后用100ng/ml的DNP-BSA刺激，微电子芯片技术观察到细胞指数呈急剧上升，达到峰值后缓慢下降，形成一个特征图谱。β-氨基己糖苷酶实验结果和荧光染色结果显示，细胞分析仪记录和产生的图谱和肥大细胞脱颗粒过程一致。运用微电子细胞芯片技术描绘四种已知的重要调节酶(Syk,PKC,Src,SHP-2)的小分子抑制剂对肥大细胞脱颗粒的作用图谱，发现均存在浓度梯度效应。进一步证明实验方法的有效性，可以用于后续筛选新的信号通路调节酶。rn 结论:过敏性疾病，是一种常见的免疫功能障碍，因其发病原因复杂并且缺乏有效治疗手段成为了制药业关注的焦点。而IgE介导的肥大细胞活化脱颗粒在过敏反应的即时阶段作用重要，因此迫切需要发现此信号通路的潜在调节分子，以作为新药研究的新靶点。目前与IgE介导的有关信号检测，传统方法测量的是介质释放的累计量，也涉及标记和操作细胞，同时需要利用昂贵试剂，不适合于高通量筛选。而本实验利用微电子细胞芯片技术建立并验证的肥大细胞脱颗粒检测方法，筛选出关健的蛋白激酶和磷酸酶，为今后药物筛查开辟新的领域。

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来源
《中国药理学会抗炎免疫药理专业委员会第十一届全国学术会议》|2014年|167|共1页
会议地点苏州
作者
秦申璐; 柯越海;
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作者单位

中国药理学会抗炎免疫药理专业委员会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 R593.102;
关键词
过敏性疾病; 微电子细胞芯片技术; 肥大细胞脱颗粒; 蛋白激酶; 磷酸酶;

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