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堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)北京株α-微管蛋白基因的克隆和表达

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采用组织提取法提取堆型艾美耳球虫(E. acervulina)北京株的RNA,以其为模板,参考GenBank上E. acervulina的α-微管蛋白基因序列,设计合成特异性引物,对E. acervulina北京株RNA进行RT-PCR.1﹪琼脂糖电池表明所得基因片段的大小为1950bp左右.回收该片段,将其与pGEM<'(R)>-T连接,转化致大肠杆菌DH5α中.用蓝白斑筛选阳性克隆,碱裂解法提取质粒,经限制性内切酶BamH I/EcoR I双酶切及PCR鉴定正确后,进行序列测定.序列分析显示,克隆后所得基因与GenBank上登录的E. acervulina的α-微管蛋白的基因相比,二者的同源性达到97.4﹪.以测序质粒为模板,重新设计表达引物,克隆α-微管蛋白基因的阅读框基因片断(不包含疏水区),并与表达载体pGEX-6P-1相连接,转化致大肠杆菌BL21(DE3)中,1mM IPTG诱导,SDS-PAGE电泳结果表明表达蛋白的大小为69kDa,诱导后5h蛋白表达量即达到高逢.用GST抗体进行Western-blot检测,在69kDa处检测到目的条带.

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来源
《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第5次代表大会暨第8次学术研讨会》|2004年|38-42|共5页
会议地点桂林
作者
鲍卫超; 刘群;
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作者单位

中国畜牧兽医学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类兽医原虫学;
关键词
艾美耳球虫; α-微管蛋白基因; 基因克隆;

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