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绿色荧光蛋白在基因传染中作为标记物应用的前期研究

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近年来,随水母Aequora victoria来源的绿色荧光蛋白(green flurescent protein,GFP),由238个氨基酸组成,稳定发蓝、绿色荧光,GFP作为一种新型的报道蛋白在生物学界引起了广泛的关注,它已吸引了从生命科学(包括细胞生物学、分子生物学、发育生物学、遗传学及生物技术等)到生物医学及农学许多领域研究者的兴趣.为了探讨绿色荧光蛋白在真核细胞中的表达及其毒性问题,本文将这种真核表达载体质粒pEGFPL/CMV分别转染人脑胶质瘤细胞U251、人肝癌细胞Hep 3B、人膀胱癌细胞株T24和人小细胞肺癌株LTEP-P等几株肿瘤细胞;另外,还转染入正常细胞——原代地鼠肾细胞以全面了解GFP的表部及其对细胞生长是否有影响——即GFP对细胞是否具有毒性;并以Hep 3B细胞为例展开阐述.我们将质粒pEGFPL/CMV以质体DOTAP为介导,转染到Hep 3B细胞中,经台盼蓝染色计数、荧光显微镜观察、MTT检测、吖啶橙染色、LDH检测、琼脂糖凝胶电泳、乙肝HBsAg测定等方法来确定GFP对细胞生长和增殖的影响,从而以判断GFP是否具有毒性;结果表明GPF能在Hep 3B中表达,荧光显微镜下可见明亮的绿色荧光,且表达GFP的细胞生长与增殖均未受到影响;亦即GFP对Hep 3B没有毒性,有望作为理想的报道蛋白;为今后以GFP作为报道蛋白提供实验基础.

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来源
《第七次全国生物制品学术会议》|2003年|175-181|共7页
会议地点北京
作者
管世鹤; 全家妩;
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作者单位

中国微生物学会;

中国预防医学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类目的基因的获得;抗体蛋白与干扰素蛋白;
关键词
pEGFPL/CMV; 绿色荧光蛋白GFP; 脂质体DOTAP Hep 3B; 毒性; 真核细胞; 基因转染;

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