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THP基因的重新克隆及草菇表达载体的构建

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采用PCR技术,以Primer AFP1和Primer AFP2为引物,克隆了连接在未知载体上的THP基因并重新连接在pGEMR T-Vector上,形成质粒pGTHP4.以限制性内切酶BstEⅡ和NcoⅠ双酶切质粒pCAMBIA1301.1℅琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物并以凝胶DNA提取纯化Kit回收带有启动子的大片段;以限制性内切酶BstZⅠ和NcoⅠ双酶切质粒pGTGP4之后,以相同的方法回收带有THP目的基因的小片段;大片段和小片段在T4 DNA连接酶的作用下首先进行NcoⅠ酶切的两个匹配粘性末端的连接,回收连接产物后加入特定接头和T4 DNA连接酶进行连接环化,结果构建了带有THP目的的基因的草菇表达载体pCTH526.

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来源
《全国第六届食用菌学术研讨会》|2001年|97-100108|共5页
会议地点福州
作者
郭丽琼; 林俊芳; 陈守才; 熊盛;
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作者单位

中国农学会;

中国菌物学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类生物学原理;
关键词
草菇; THP基因; 草菇表达载体; PCR技术;

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