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首页> 中文会议>中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会 >猪繁殖与呼吸综合症病毒Nsp9单域抗体库的构建

猪繁殖与呼吸综合症病毒Nsp9单域抗体库的构建

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为了制备特异性针对PRRSV Nap9的并且可以抑制病毒感染的纳米抗体，构建了针对Nsp9的双峰驼重链抗体可变区抗体文库。rn 首先利用pET28a载体构建了Nsp9全长的原核表达载体，并将其导入BL21表达菌中。表达并纯化Nsp9重组蛋白，利用His单抗和PRRSV阳性猪血清鉴定重组蛋白免疫反应性。将重组蛋白与弗氏佐剂充分混匀免疫4岁健康雄性阿拉善双峰驼，经过5轮免疫后采集实验动物血液，分离外周血淋巴细胞，提取总RNA并反转录cDNA，根据骆驼重链抗体可变区上下游保守序列设计引物，利用PCR扩增VHH基因，将其连入pCANTAB SE噬菌体载体，转化TG1感受态细胞制备双峰驼重链抗体可变区抗体文库。表达并纯化了具有较强免疫反应性的可溶性Nsp9重组蛋白，ELISA结果显示猪体在攻毒后14d左右可以检测到Nsp9的抗体，抗体滴度在功毒后28 d可以达到较高的水平。双峰驼经过5轮免疫后抗体效价达到1:50 000，采集血液后，从350 mL全血中分离得到3×108个外周血淋巴细胞。提取RNA并反转录后，利用PCR扩增得到400 by左右的VHH条带，将其连入pCANTAB 5E噬菌体展示载体中，电转化TGI感受态细胞，得到了库容量为2×108的双峰驼重链抗体文库。rn 猪体感染PRRSV后可产生针对Nsp9的抗体。可溶性Nsp9重组蛋白有望用于针对PRRS的血清学检测。本文构建的抗体库库容大且丰度较高，可用于Nsp9纳米抗体的筛选。

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