蓝舌病病毒群特异性抗原捕获ELISA方法的建立

摘要

目的:蓝舌病(BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒(BTV)引起的反刍动物虫媒传染病.不同流行地区易感动物的死亡率差别很大,一般可达30%,在某些地区绵羊感染后死亡率甚至高达80%.目前为止已有报道证实BT血清型已达26种之多,并且每种血清型之间没有交叉保护作用,増加了BT防控的难度,因此建立切实有效的抗原检测方法对于BTV的监控闻言是至关重要的.本研究利用实验制备保存的针对于BTV VP7蛋白的单克隆抗体(MAb)建立BTV群特异性抗原捕获ELISA方法,为BTV疫苗定量以及抗原监测奠定基础.rn 方法:BTV灭活抗原、茨城病毒(IBAV)、赤羽病毒(AKAV)、牛轮状病毒(BRV)、口蹄疫病毒(FMDV)等由哈尔滨兽医研究所提供;采用Protein ASepharoseTM CL-4B亲和层析纯化制备的MAb 1F6与4H7腹水,利用简易过碘酸钠法进行HRP-MAb 4H7标记试验;利用矩阵法确定抗原捕获ELISA术式及反应条件。rn 结果:建立BTV群特异性抗原捕获ELISA方法,对己知抗原BTV,IBAV,AKAV,BRV, FMDV进行检测,发现所建立的抗原捕获ELISA方法仅对BTV灭活病毒液呈阳性反应,对其它相关病毒以及BHK-21细胞裂解液呈阴性反应。敏感性检测最低检出量为400TCIDSO.rn 结论:本实验所建立的BTV群特异性抗原捕获ELISA方法具有较好的敏感性和特异性,可以用于BTV病原检测以及疫苗定量。

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