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水稻纹枯病菌对井冈霉素抗药性研究

摘要

稻纹枯病又称云纹病,是水稻生产中的毁灭性病害.在发病条件适宜的年份,水稻纹枯病可以造成水稻50%的产量损失.该病病原为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)AG1IA融合亚群.井冈霉素是中国用以水稻纹枯病防治用量最大的农用抗生素.水稻纹枯病菌对井冈霉素的抗药性风险较低,但近几年来,随着用药量和施药频率的增大,田间已经出现了防效下降的现象.监测水稻纹枯病菌对井冈霉素的抗药性发生发展情况,解析其抗药性机制对于延缓抗药性的发生和发展以及指导田间科学用药均有重要意义.本研究以分离自上海地区的5株抗性菌株和分离自广西、福建、上海等地的7株敏感菌株为研究材料。采用E培养基法,测定了抗性菌株对井冈霉素的敏感性,5株抗性菌株的ECso值为14.9-30.2ug/mL,抗性水平介于3.4-6.9倍,属于低抗菌株。井冈霉素的作用机制是海藻糖酶的竞争性抑制剂,因此推测海藻糖酶合成途径的变化导致了抗药性的产生。克隆了抗、敏菌株的4个海藻糖合成相关基因,其中包括2个海藻糖-6-磷酸合成酶编码基因(TPSl-A,TPSl-B,该酶为海藻糖合成的关键酶;海藻糖-6-磷酸酯酶编码基因(TPS2);海藻糖磷酸化酶编码基因(TPase),该酶在一定条件下,既能催化海藻糖合成又能催化其分解。结果未发现与井冈霉素抗药性相关的基因点突变。将抗、敏菌株在药剂浓度为20ug/mL的液体培养基中摇培3天后,以未加药处理为对照,利用RT-Real-time PCR的方法,检测了4个基因在药剂诱导下的表达量。结果显示,抗性倍数为3.4倍的低抗菌HJE的TPSl-B和TPase基因表达量出现了显著上调,推测两基因的上调为低倍抗药性产生的原因。检测了抗、敏菌株在侵染水稻不同时间阶段的海藻糖合成相关基因的表达量,结果显示,TPS2基因表达量最高,TPSl-B基因的表达量最低。侵染过程中,TPase基因在侵染后12h前表达量较低,在18h到24h表达量最高,推测TPase基因可能与其侵染过程相关。

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