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BNYVV RNA4编码的P31蛋白在本生烟中瞬时表达检测体系的建立

摘要

本研究将BNYVV P31编码基因构建到分别带有6x Myc和GFP标签的pSuper1300超表达载体上,转化农杆菌EHA105浸润本生烟下表皮瞬时表达P31。瞬时表达P31在本生烟叶片上无明显症状。在浸润后第三天western blot检测P31的表达情况,利用P31、Myc和GFP血清均能检测到P31蛋白表达。为明确P31在浸润后不同时间点的表达情况,分别在浸润后第2、3、4、5、6、7天采样并检测,结果表明在浸润后第2、3天蛋白表达量较大,浸润四天后蛋白表达量降低,至第7天几乎检测不到蛋白表达。基因沉默抑制子P19存在时能够增加P31的表达量,即使在浸润7天后,仍能检测到P31的少量表达。为探究P31是否被泛素化途径降解,将泛素化抑制剂MG132与P31共浸润,结果表明MG132并不能增加P31蛋白表达量。

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