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含有马铃薯卷叶病毒PO蛋白的PVX重组病毒在本生烟上致病性的分析

摘要

本研究将PLRV PO的野生型及突变体(159A/P60A,L76A/P77A,W140A,F220R,W87A),序列插入pND108(由PVX改造的)载体中构建重组病毒,通过农杆菌(GV3101)浸润接种本生烟的方法探究影响重组病毒致病性的关键氨基酸位点。对接种叶(6dpi)和系统叶(lOdpi)表型的观察结果表明,表达POPL的PVX重组病毒的致病性增强。突变体L59A/P60A、W140A和F220R的PVX重组病毒在接种叶和系统叶均表现出明显的坏死表型并伴有卷叶,而突变体POPLL76A/P77A和POPLW87A的PVX重组病毒并未出现明显的坏死表型。对坏死叶片进行电导率的测定和台盼蓝染色,结果与叶片表型观察结果一致。RT-PCR检测结果显示POPL及其突变体的PVX重组病毒在系统侵染时外源插入片段稳定,并未丢失。对系统叶中PVX CP蛋白的Western blotting检测和ELISA检测结果可知,PVX重组病毒致病性的增强并不是重组病毒复制积累量增加的结果,而应是插入的PO基因表达产生的影响。由突变体L76A/P77A和W87A的PVX重组病毒的致病性未显著增强判断,这两处氨基酸位点应是影响重组病毒致病性的关键位点。

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