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胁迫条件下毛竹miR164b及其靶基因PeNAC1表达研究

摘要

MiRNAs是一类长度约为21nt的非编码小RNA,可在转录水平通过碱基互补配对降解靶基因,在植物生长发育以及抗逆等过程中起着重要的调控作用.植物miR164作为植物特有的miRNA,其主要的靶基因是植物NAC转录因子.通过茎环引物法和RT-PCR技术,从毛竹(Phyllostachys edulis)中克隆出miR164b成熟序列和其靶基因PeNAC1,序列分析表明miR164b 的靶点位于PeNAC1 编码区,RLM-5′RACE PCR 产物测序结果证实切割位点位于靶点的第10-11 位碱基之间.组织特异性表达分析结果显示,毛竹miR164b 和PeNAC1 在根、茎、叶及鞘中均表达,其中miR164b 在根中表达丰度最高,在茎中表达丰度最低;而PeNAC1 的表达丰度恰好与miR164b 相反.实时定量PCR 结果显示,高温(42 ℃)、低温(4 ℃)、强光(1500 μmol·m-2·s-1)、干旱和NaCl(250 mmol·L-1)处理后,毛竹叶片中miR164b 的表达均下调,而黑暗和GA3 (100 μmol·L-1)处理后,miR164b表达量均上调;而在同样处理条件下,PeNAC1 的表达恰好呈现出与其完全相反的趋势.由此表明,miR164b 对靶基因PeNAC1 具有表达调控作用,可能在毛竹响应非生物胁迫的抗逆过程中密切相关.

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