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pcDNA3.1(+)/EMC6真核表达载体的构建及其在人肝细胞L-02中的表达

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目的:构建pcDNA3.1(+)/EMC6真核表达载体,并将其在人肝细胞株L-02中过表达,为研究自噬在肝脏发病的作用奠定基础. 方法:查询PubMed上EMC6的基因序列,针对该序列设计引物,提取L-02细胞mRNA、聚合酶链式反应(PCR)扩增目的片段,采用基因重组技术将EMC6的cDNA定向插入真核表达载体pcDNA3.1中,构建pcDNA3.1(+)/EMC6真核表达载体,经菌落PCR,测序验证构建的准确性.应用脂质体转染方法将重组载体转入L-02细胞中,RT-PCR、Western-blot检测EMC6基因的mRNA和蛋白表达水平. 结果:PCR和基因测序结果均表明pcDNA3.1/EMC6重组质粒构建成功,RT-PCR和Western-blot结果证实EMC6在人肝L-02细胞中过表达. 结论:成功构建了人pcDNA3.1(+)/EMC6重组质粒,并在L-02细胞中过表达.

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来源
《第二十九届全国中西医结合消化系统疾病学术会议》|2017年|667-672|共6页
会议地点成都
作者
Syed Hameed Ali Shah; Syed Hameed Ali Shah; He Da-wei; 何大伟; He Ao-lin; 何敖林; Li Sha-sha; 李莎莎; Wang Bing-fang; 王炳芳;
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作者单位

中国中西医结合学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 R575.023.2;
关键词
肝脏疾病; 发病机制; 细胞自噬; 内质网膜蛋白复合体亚基-6基因; 基因表达;

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