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HSP27基因在母牦牛生殖器官和孤雌激活胚胎中的表达

摘要

通过克隆牦牛热休克蛋白27(heat shock proteins27,HSP27)基因,分析其生物学特性,探讨正常生理条件下HSP27基因在繁殖周期母牦牛主要生殖器官及不同时期牦牛孤雌激活胚胎中的表达差异,来阐明HSP27基因在牦牛中的生物学作用,为其生产应用提供理论依据.采取卵泡期后期、黄体期后期同侧的卵巢、输卵管和子宫,以及妊娠期早期(胚胎约长2.3cm)妊娠侧的卵巢、输卵管和子宫组织,以其cDNA为模板,利用RT-PCR扩增牦牛HSP27基因,并将纯化的PCR产物克隆到pMDTM 18-T Vector载体中进行测序;利用生物信息学软件对HSP27基因的特征进行生物信息学分析,预测功能结构域;采用实时荧光定量PCR检测HSP27基因在繁殖周期母牦牛主要生殖器官和不同时期牦牛孤雌激活胚胎中的相对表达量;采用western-blot法研究HSP27蛋白在繁殖周期母牦牛主要生殖器官中的表达量;采用免疫组织化学SP法和间接免疫荧光染色分别研究HSP27蛋白在繁殖周期母牦牛主要生殖器官和不同时期孤雌激活胚胎中的分布情况,用SPSS21.0软件对试验数据进行差异显著性分析.

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