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首页> 中文会议>2016第六届中国兽药大会（中国畜牧兽医学会动物药品学分会第五届全国会员代表大会暨2016学术年会、中国微生物学会兽医微生物学专业委员会、中国畜牧兽医学会生物制品学分会2016年联合学术大会） >猪繁殖与呼吸综合征病毒重组猪瘟C株E2蛋白全长感染性克隆的构建及分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒重组猪瘟C株E2蛋白全长感染性克隆的构建及分析

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目的：猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)和猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)都是临床上严重威胁养猪业的一种严重的接触性传染病.对养猪业造成的经济损失巨大.其致病病原分别为PRRSV和CSFV.CSFV的囊膜糖蛋白E2(gp55)是一种重要的保护性抗原,具有高度的免疫原性,可以诱导机体产生高水平的中和抗体.本研究基于高致病性PRRSV细胞致弱株HuN4-F112的反向遗传操作平台,将CSFV疫苗株C株的E2基因插入PRRSV基因组ORF1b和ORF2之间,获得能够稳定表达猪瘟C株E2蛋白的重组PRRSV vA-C-E2,对其进行一系列病毒特性分析及遗传稳定性检测;并在病毒复制、转录、翻译水平对其与亲本病毒进行比较分析,初步评估其作为疫苗候选株的可行性.rn 材料与方法：在高致病性PRRSV细胞传代致弱株感染性克隆pHuN4-F112的反向遗传操作平台上，通过SOE PCR的方法获得在PRRSV基因组ORFlb和ORF2之间插入CSFV C株的E2基因，构建突变全长感染性克隆pA-C-E2。通过病毒拯救获得重组病毒vA-C-E2。然后在MARC-145细胞上传代至第20代。对其突变区域进行测序分析检测其遗传稳定性。通过间接免疫荧光(IFA)检测外源基因C株E2蛋白的表达情况以及PRRSV自身N蛋白的表达情况。并通过空斑形态学、病毒多步生长曲线等比较重组病毒vA-C-E2与亲本病毒的病毒生物学特性。rn 结果：成功构建插入CSFV C株E2基因的PRRSV全长感染性克隆，经病毒拯救出重组病毒vA-C-E2，在MARC-145细胞上连续传代结果发现vA-C-E2可以在至少20代的细胞传代中保持遗传稳定。IFA结果显示vA-C-E2能够稳定表达CSFV的E2蛋白以及自身的核衣壳蛋白N。在病毒学特性分析方面，与亲本病毒vHuN4-F112相比，vA-C-E2无论在病毒空斑形态，病毒增殖趋势上都与亲本病毒无显著差异，获得了一株良好的稳定表达猪瘟E2蛋白的PRRSV重组病毒。rn 结论：本研究中所获得的表达猪瘟C株E2蛋白的重组PRRS病毒vA-C-E2与亲本疫苗毒vHuN4-F112在病毒学特性方面无显著差异，并且同时可以表达PRRSV的N蛋白和CSFV的E2蛋白，vA-C-E2可作为一种能够同时为PRRSV和CSFV感染提供保护的疫苗候选株，以期突破临床上两种病毒疫苗同时使用所造成的相互影响，减少免疫次数，达到“一针防两病”的效果。

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