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荧光定量RT-PCR检测猪PD-1和PD-L1 mRNA方法的建立

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目的:本研究为建立荧光定量RT-PCR检测猪PD-1及其配体PD-L1 mRNA的方法。方法:根据GenBank中猪PD-I和PD-L1的基因序列，分别设计2对特异性引物，PCR扩增目的基因片段，回收与pMD18-T连接后转化DH5α，提取重组质粒，作为标准品，制备标准曲线，并进行特异性、重复性和应用性检测。结果:标准曲线PD-1和PD-L1两个样品相关系数R2分别为0.997和0.998，均大于0.99，线性关系好，扩增效率分别为86.03%和102.40%;溶解曲线出现狭窄单一峰，荧光定量PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，出现单一目的条带，无引物二聚体，特异性强;检测PD-1和PD-L1组间的变异系数分别为0.592%和0.847%，重复性好;应用性结果表明，正常猪外周血单核细胞中PD-1和PD-L1的基因表达水平稳定，该检测方法的稳定性好。结论:本试验建立了实时荧光定量RT-PCR检测猪PD-1和PD-L1基因表达量的方法。本研究建立的荧光定量RT-PCR检测PD-1和PD-Ll的基因表达模式，为进一步研究猪免疫抑制性传染病如CSF、PRRS感染后，PD-1和PD-L1的表达模式奠定基础，从而进一步丰富猪免疫抑制性传染病引起的免疫抑制机理。

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来源
《河南省畜牧兽医学会第八届会员代表大会暨2013年学术研讨会》|2013年|595|共1页
会议地点郑州
作者
王选年; 岳锋; 朱艳平; 张艳芳; 孙国鹏; 李鹏; 银梅; 杨媛;
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作者单位

河南省畜牧兽医学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 S858.28:S852.4;
关键词
猪; 免疫抑制; 程序性死亡分子1; 程序性死亡分子1配体; 荧光定量反转录聚合酶链反应;

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