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高山被孢霉亚甲基四氢叶酸脱氢酶的克隆、表达和功能鉴定

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叶酸代谢途径中的亚甲基四氢叶酸脱氢酶(MTHFD)可将5,10-亚甲基四氢叶酸氧化为5,10-甲炔基四氢叶酸,此过程会生成NADH或NADPH.对高山被孢霉中的MTHFD基因进行克隆、表达和功能鉴定,可进一步阐明脂质合成所需还原力NADPH的来源.首先对MTHFD序列进行分析,并以pET28a(+)质粒为载体构建了MTHFD的表达载体,然后转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达.进一步利用Ni金属螯合层析纯化目的蛋白,采用比色法分析酶反应产物,表明纯化蛋白质具有MTHFD活性.高山被孢霉MTHFD对NAD+和NADP+均具有催化能力,但更偏好于将NADP+转化为NADPH.最后对高山被孢霉进行发酵培养,发现MTHFD的转录水平在脂质开始积累后发生了明显的上调,表明MTHFD在高山被孢霉脂质合成过程中发挥重要作用,很可能是脂质合成所需NADPH的关键来源.这为对高山被孢霉进行分子改造,使之成为高产各种多不饱和脂肪酸的细胞工程提供了理论依据.

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来源
《2017 发酵工程关键技术与工艺装备创新研讨会》|2017年|11-17|共7页
会议地点青岛
作者
WANG Hong-chao; 王鸿超; 张陈; ZHANG Chen; CHEN Dian-ning; 陈殿宁; QIAO Ju-yuan; 乔菊园; CHEN Hai-qin; 陈海琴; GU Zhen-nan; 顾震南; ZHANG Hao; 张灏; 陈卫; CHEN Wei; CHEN Yong-quan; 陈永泉;
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作者单位

中国国际科技促进会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 Q949.320.3;
关键词
高山被孢霉; 亚甲基四氢叶酸脱氢酶; 基因克隆; 基因表达; 功能鉴定;

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