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弓形虫自噬相关基因ATG8的克隆、表达及过表达虫株的构建

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已有研究发现弓形虫自噬相关蛋白ATG8(TgATG8)可作为虫体自噬的标志蛋白,本研究PCR扩增出全长375bp的TgATG8,构建原核表达载体pET-28a TgATG8,表达、纯化重组TgATG8,获得高纯度的蛋白,能与猪的弓形虫阳性血清发生反应；给小鼠免疫纯化蛋白,制备鼠抗TgATG8多克隆抗体,抗体滴度达106,与弓形虫全虫抗原具有良好反应性；western blot鉴定证实其具有良好的反应性.在此基础上,选取TgATG8片段,链接到经双酶切的pDXF,连接转化、挑取单克隆,经测序和双酶切鉴定确认pDXF-ATG8构建成功.将pDXF-ATG8电击、转染入弓形虫RH株,经药物筛选,获得了稳定表达ATG8-GFP的虫株.为弓形虫自噬的进一步研究奠定了基础.

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来源
《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会》|2013年|200|共1页
会议地点郑州
作者
王辉; 雷涛; 李木子; 刘晶; 刘群;
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作者单位

中国畜牧兽医学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 S858.28:S852.723;
关键词
猪弓形虫; 自噬标记蛋白; 原核表达; 多克隆抗体;

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