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镰形扇头蜱丝氨酸蛋白酶SP30基因的克隆及原核表达

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本研究根据丝氨酸蛋白酶保守性氨基酸序列设计引物,以镰形扇头蜱半饱血雌蜱cDNA为模板,经PCR技术得到SP30基因的保守区,通过5,RACE和3,RACE技术得到基因全长.SP30基因全长l194bp,开放阅读框长900bp,编码299个氨基酸,预计蛋白分子质量30kDa.将该基因连入原核表达载体PGEX-4T-1,经诱导纯化得到与预期大小相同的重组蛋白.Real-Time PCR分析基因在镰形扇头蜱不同发育阶段的表达情况提取镰形扇头蜱卵、幼蜱、若蜱、成蜱RNA,反转录得到cDNA,取等量的cDNA为模板进行PCR扩增,同时用elongation factor1α(ELF1A)作内参基因.结果表明,该基因在若蜱阶段表达量最高,成蜱阶段次之,而在卵和幼蜱阶段表达量相对比较低.

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来源
《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会》|2013年|320-321|共2页
会议地点郑州
作者
关洁; 曹杰; 张厚双; 周勇志; 周金林;
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作者单位

中国畜牧兽医学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 S852.746;
关键词
兽医学; 镰形扇头蜱; 丝氨酸蛋白酶; 基因克隆; 原核表达;

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