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HPLC法测定术后疲劳综合征大鼠骨骼肌ATP,ADP,AMP的含量

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目的:建立改良的高效液相色谱(HPLC)法测定术后疲劳综合征(POFS)大鼠骨骼肌5'-三磷酸腺苷(ATP)、5'-二磷酸腺苷(ADP)、5'-磷酸腺苷(AMP)的含量.方法:采用色谱柱Hypersil ODS2(4.6mm×150mm,5μm),柱温25℃;流动相为100mmol·L-1磷酸盐缓冲液(含12mmol·L-1的磷酸氢二钠和88mmol·L-1的磷酸二氢钠,pH =6.5)-甲醇(99.9:0.1,体积比);流速1.0rmL·rmin-1;紫外波长为254nm;进样量20μL.结果:ATP、ADP、AMP色谱峰在10rmin内得到了较好的分离,在测定范围内均呈良好的线性关系,r分别为1.000,0.9996,0.9994;精密度试验日内RSD≤4.1％,日间RSD≤3.5％;稳定性试验RSD≤4.8％;重复性试验RSD≤2.3％;回收率在97.1％～105.4％之间,RSD≤4.8％.应用改良的方法对模型组大鼠和对照组大鼠骨骼肌ATP、ADP、AMP的含量进行检测.结果显示,与对照组相比,模型组大鼠骨骼肌ATP含量在术后第1,3d明显下降(P＜0.05),ADP含量在术后第7d明显升高(P＜0.05),术后第10d升高特别显著(P＜0.01),AMP含量在术后第10d明显升高(P＜0.05).结论:该方法操作简便,检测时间短,结果准确可靠,可以检测POFS大鼠骨骼肌ATP、ADP、AMP的含量,有助于POFS骨骼肌能量代谢的进一步研究.

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