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皱纹盘鲍外套膜组织cDNA表达文库的构建及质量鉴定

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采用SMART(switchingmechanismat5'endofRNAtranscript)技术,构建了皱纹盘鲍(HaliotisdiscushannaiIno)外套膜组织的全长cDNA表达文库.按Trizol试剂盒的操作程序提取皱纹盘鲍外套膜组织总RNA,以此为模板,通过PowerScript逆转录酶逆转录合成第一链cDNA;再以第一链cDNA产物为模板,用LD-PCR法合成第二链cDNA.双链cDNA产物经SfiⅠ酶切和ChromaSpin400柱分级分离后,与λTripEx2载体进行连接,体外蛋白包装,即获得皱纹盘鲍外套膜cDNA原始文库.测定其滴度为1.2×106pfu/mL,用PCR方法测得文库的重组率大于90﹪,插入cDNA的长度平均为1.4kb.进行文库的扩增,扩增后的cDNA文库的滴度为4×109pfu/mL.

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来源
《国家“863”计划资源环境技术领域第三届海洋生物高技术论坛》|2005年|447-452|共6页
会议地点厦门
作者
李静; 张文兵; 麦康森;
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作者单位

中国21世纪议程管理中心;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类水产生物学;
关键词
皱纹盘鲍; 外套膜; cDNA文库; 贝壳生物矿化;

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