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猪瘟病毒NS3基因克隆、原核表达及间接ELISA方法初步建立

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本研究将猪瘟病毒兔化弱毒(Hog Cholera Lapinized Virus HCLV)NS3基因克隆至原核表达载体pET-32a(+)，构建成重组原核表达裁体pETNS3，在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行优化表达，SDS-PAGE分析重组蛋白NS3主要以包含体形式表达，分子大小约95 kD。Western Blotting分析表明重组蛋白NS3具有免疫原性。采用Ni+亲和层析方法纯化得到重组蛋白NS3(90%)。以重组蛋白NS3为抗原初步建立了检测CSFV抗体的间接ELISA方法，检测221份不同猪群和年龄猪的血清样品。检测结果与IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒检测结果进行对比，阳性符合率为83.33%，阴性符合率为89.38%，总符合率为86.43%。30份存在差异的血清样品用间接免疫荧光法(Indirect ImmunofluorescenceAssay IFA)进行检测，结果显示IFA检测结果与NS3间接ELISA和IDEXX公司CSFV-Ab检测试剂盒符合率分别为56.67%和43.33%。

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来源
《中国畜牧兽医学会2010学术年会暨第二届中国兽医临床大会》|2010年|1208-1213|共6页
会议地点长春
作者
蒋大良; 余兴龙; 李润成; 葛猛; 涂长春; 罗维; 颜爱; 李杰; 刘春红;
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作者单位

中国畜牧兽医学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类基因的表达;
关键词
CSFV; NS3; 基因克隆; 原核表达; 蛋白纯化; 免疫印迹; 间接ELISA;

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