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有机-无机杂化毛细管硅胶整体基质DNA微酶反应器的制备与应用

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采用核酸外切酶酶解DNA产生质量梯度与生物质谱分析相结合，可测定寡核苷酸的序列，同时也为DNA损伤位点的检测提供了方法。通过采用核酸外切酶水解核苷酸之间的磷酸二酯键，即可按照顺序从DNA寡核苷酸链的3'端或5'端降解单一核苷酸，通过控制酶解时间结合质谱分析实现对DNA损伤位点的精确测定。rn 在此，进一步将酶固定于有机-无机杂化硅胶，设计并合成了基于DNA测序的固定化微酶反应器。首先采用溶胶-凝胶法以四乙氧基硅烷(TEOS)和3-氨基丙级-三乙氧基硅烷(APTES)为单体，十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)为模板，以合适的配比通过水解-缩聚在活化的毛细管中合成有机-无机杂化整体柱;整体柱表面带有氨基基团，以带有双官能团的戊二醛处理整体柱，使一端的醛基与氨基反应，另一端的醛基裸露在整体柱表面形成交联臂，再注入蛇毒磷酸二酯酶(SVP)，使SVP以共价键的形式键合到整体柱上，制成基于DNA测序的微酶反应器。与溶液中的酶解反应相比，固定化酶减少了酶自身降解和金属配合物对DNA测序的影响，同时具有更高的酶/底物比、酶解时间可控，可重复使用等优点。

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来源
《第七届全国环境化学学术大会》|2013年|1-2|共2页
会议地点贵阳
作者
张宁; 赵超; 汪海林;
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作者单位

中国化学会;

中国环境科学学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类固定酶反应器;
关键词
脱氧核酸微酶反应器; 杂化毛细管; 硅胶基质; 制备工艺; 性能评价;

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