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首页> 中文会议>中国环境诱变剂学会第七届全国会员代表大会暨第十七次学术大会 >葡萄籽原花青素对砷诱导人肝细胞HL-7702氧化损伤及砷甲基化代谢的影响

葡萄籽原花青素对砷诱导人肝细胞HL-7702氧化损伤及砷甲基化代谢的影响

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目的:研究葡萄籽原花青素(GSPE)对砷As诱导的人肝细胞HL-7702损伤的保护作用及其机制,为砷中毒的防治和GSPE的抗氧化研究提供理论依据. 方法:将人肝细胞HL-7702分为正常对照组、As染毒组(25μmol/L)、GSPE干预组(5、10、25、50mg/L)以及单独施加GSPE组(50mg/L),分别处理24h和48h后,分别测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量以及总抗氧化能力(T-AOC)变化.噻唑蓝(MTT)法分析细胞生存率,利用实时定量聚合酶链式反应以及Western Blot法检测HL-7702细胞中核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)和谷胱甘肽巯基转移酶(GST)的mRNA以及蛋白表达.采用高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱(HPLC-HGAFS)法测定细胞中的无机砷及其代谢产物(MMA、DMA)的含量;利用双抗体夹心ELISA试剂盒检测细胞中MRP1、SAM及As3MT的含量.组间比较采用单因素方差分析. 结果:MTT实验发现,与对照组比较,高浓度As(≥25μmol/L)染毒组,细胞存活率明显降低(P＜0.05).与As染毒组比较,GSPE干预组细胞中的ALT、AST水平明显低于As染毒组(P＜0.05).GSPE干预组的HL-7702细胞中SOD、GSH以及T-AOC水平明显高于As染毒组(P＜0.05),而MDA水平明显低于As染毒组(P＜0.05);与As染毒组比较,GSPE干预组HL-7702细胞中Nrf2、HO-1、NQO1,GST的mRNA及蛋白表达增高(P＜0.05).GSPE能增加细胞内的MMA和DMA含量,并显著提高细胞内PMI和SMI;As3MT随着GSPE浓度升高表达增加(P＜0.05);单纯施加GSPE对细胞SAM表达影响不大,在染砷的情况下同时施加GSPE显著降低细胞SAM的表达(P＜0.05):GSPE可显著增加细胞MRP1的表达(P＜0.05). 结论:GSPE对砷诱导的人肝细胞HL-7702氧化损伤具有拮抗作用,且具有一定的剂量反应关系,其机制可能是通过激活Nrf2介导的抗氧化信号通路,提高细胞抗氧化能力,改变砷甲基化代谢水平.

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