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首页> 中文会议>中国康复医学会脑血管病专业委员会换届暨第十五次全国脑血管病康复学术年n会、湖南省康复医学会神经康复专业委员会2012学术年会 >Chemerin对HUVEC功能影响的初步探讨

Chemerin对HUVEC功能影响的初步探讨

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目的:通过测定与分析多种内皮细胞分泌因子的水平,包括:细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)和血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1),一氧化氮(nitric oxide,NO),炎性因子白介素-6(Interleukin-6,IL-6)探索不同浓度Chemerin干预对基础水平的人脐静脉内皮细胞功能的影响及生理浓度的Chemerin对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)诱导的血管内皮细胞损伤模型的影响.通过检测并分析细胞内生存关键通路磷脂酰肌醇3激酶途径中(Phosphatidylinositol 3-kinase/Akt,P 13 K/Akt)AKT,磷酸化AKT(p-AKT),内皮型一氧化氮合酶(Endothelial nitric oxide synthase,eNOS)及磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)表达水平,探讨Chemerin的可能作用机制.rn 方法:1.培养人脐静脉内皮细胞-12细胞株(Human Umbilical Vein EndothelialCells-12,HUVEC-12),依据不同浓度的重组Chemerin分别干预24小时或48小时,共12组,Chemerin浓度(0,5,25,50,100,200ng/ml)分别为24小时①-⑥组,48小时⑦-(○12)组,应用Griess法测定细胞培养液上清液中NO水平;ELISA试剂盒检测细胞内IL-6、ICAM-1、VCAM-I水平.通过单因素方差分析及多重比较,得出Chemerin对基础水平的血管内皮细胞的影响,并结合既往资料与实验结果推算最适干预浓度与时间(浓度:Chemerin 100ng/ml,干预时间:24小时);2.Chemerin对TNF-a诱导的HUVEC-12细胞损伤模型的影响:设A为未加药物的空白对照组;B为Chemerin组:给予终浓度为(100ng/ml)Chemerin干预;C为TNF-a组给予终浓度为(50ng/ml)TNF-a干预;D为Chemerin+TNF-a组给予终浓度分别为100ng/mlChemerin+50ng/mlTNF-a干预:E为LY294002组,LY294002为P13K特异性抑制剂,给予终浓度分别为100nglmiChemerin+50ng/ml TNF-a+20μmol/LLY294002干预.于24小时应用上述方法检测细胞培养上清液中NO水平;HUVEC的IL-6、ICAM-1、VCAM-1水平,应用Real-time PCR检测各组HUVEC-12的AKTmRNA表达水平,Western Blot法测定AKT,p-AKT,eNOS,p-eNOS蛋白水平.通过统计学软件计算分析结果,以P<0.05为有统计学意义.rn 结果:1.Chemerin能上调HUVCE-12细胞培养上清液中的NO水平,并且在5ng/ml24小时即明显增高,其诱导作用在(0-100ng/ml )范围内呈浓度依赖((P<0.05),在25-200ng/ml浓度范围48小时组较24小时组增高无统计学意义(P>0.05),而5ng/ml组48小时组较24小时组NO的水平增高(P<0.05),各组IL-6、ICAM-1、VCAM-1之间相比无差异(P>0.05);2.Chemerin组较空白对照组,NO的水平明显上升(P<0.01),p-AKT、eNOS及p-eNOS的水平增加(P<0.01),对AKT蛋白及AKT mRNA的表达无影响(P>0.05):3.Chemerin+TNF-a组较TNF-a组IL-6、ICAM-1、VCAM-1、NO的水平均明显下降(P<0.01),p-AKT、eNOS及p-eNOS的水平增加(P<0.01),对AKT蛋白水平及AKTmRNA表达无影响(P>0.05);4.LY294002组较Chemerin+TNF-a组ICAM-1,VCAM-1,NO增高(P<0.05),IL-6未见明显改变(P>0.05),下调p-AKT(P=0.000),p-eNOS及eNOS蛋白表达(P<0.05),但对AKT蛋白水平及AKTmRNA表达无影响(P>0.05).rn 结论:1.Chemerin能抑制炎性损伤的血管内皮细胞分泌粘附分子和炎性分子,可能对损伤的内皮细胞具有保护作用;2.Chemerin可以上调NO的释放,以上作用与eNOS及p-eNOS活化有关,P13K/AKT-eNOS途径参与了上述作用;3.Chemerin对炎性损伤下的内皮细胞具有保护潜能,可成为动脉粥样硬化研究的靶点.

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