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SET shRNA慢病毒载体的构建及其在肝细胞中的表达鉴定

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目的：构建SET基因shRNA慢病毒表达载体,为研究SET在TCE毒性机理中的作用提供技术支持.方法：通过NCBI检索SET序列和查阅文献,设计合成5对shRNA片段,退火后连接到慢病毒载体pLVX-shRNA1 vector.挑取筛选的单菌落,经PCR和测序鉴定后提取质粒.将质粒共转染到293T细胞,收集病毒上清,转导L-02肝细胞中,利用嘌呤霉素筛选得到SET缺陷型细胞,最后利用荧光定量PCR和Western Blot鉴定干扰效果.结果：PCR和测序结果证明双链shRNA已经正确插入慢病毒载体pLVX-shRNA1 vector,共转染293T细胞得到高滴度病毒,转导L-02细胞筛选出SET基因缺陷型细胞.结论：利用慢病毒介导RNAi技术成功构建了SET基因缺陷型细胞.

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来源
《中国科协第十四届年会第十七分会场—环境危害与健康防护研讨会》|2012年|366-370|共5页
会议地点石家庄
作者
黄新凤; 叶金波; 蒋英芝; 任晓虎; 黄培武; 刘建军;
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作者单位

中国科协;

中国环境诱变剂学会;

中国生物医学工程学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类有机毒物;
关键词
慢病毒载体; RNA干扰; 蛋白表达; 基因缺陷型细胞; 三氯乙烯;

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