极端嗜热古菌蛋白酶Pyrolysin嗜热分子机制研究

摘要

本研究构建了Pyrolysin的系列突变体,对其加工成熟、N端前肤及C端延伸区的功能进行了研究。结果表明,Pyrolysin在高温下由酶原Pls加工转变为成熟酶mPls,成熟酶的产生需要切除N端前肽和C端前肽。除了作为分子伴侣,N端前肽还是成熟酶的抑制剂,在被降解之前通过抑制成熟酶的活性以提高成熟效率。缺失C端199 as的突变体Pls} C199可以加工形成成熟酶mP1s0 C199,其分子量大小和活性与mPls类似,但稳定性略低,说明C端前肚不直接参与酶原的成熟,但对成熟酶的热稳定性有一定影响。此外,与mPls相比,缺失C端延伸区的成熟酶mPls△C740在活性和稳定性等方面都有明显降低,但二者的底物特异性差异不明显。许多极端嗜热古菌蛋白酶具有长的C端延伸区,本研究结果有助于深入理解这类酶耐受极端高温条件的分子机制。

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