布鲁氏菌弱毒疫苗株M5-90 BP26和OMP31蛋白T细胞表位的鉴定

摘要

布鲁氏菌为胞内寄生菌,而CD4+/CD8+细胞分泌的高水平IFN-γ等细胞因子能有效抑制胞内寄生菌;另外CTL的细胞毒作用和Th1型细胞免疫应答,对诱发长效抵抗布菌感染也是至关重要;BP26和OMP31蛋白为布菌疫苗中的优势抗原,能引起显著地体液和细胞免疫应答,并含有保护性抗原表位;为填补我国M5-90疫苗株保护性抗原T细胞表位信息的空白,鉴定BP26和OMP31抗原的CTL和Th细胞的表位,本研究对8只新疆细毛羊进行多次免疫,每次10亿菌/只;免疫15天经虎红平板试验验证免疫成功后,进行ELISpot检测:取静脉血分离PBMC与BP26和OMP31的16氨基的重叠肽(重叠7个氨基)共孵育后检测IFN-γ的分泌情况,以大于阴性对照两倍的斑点数为阳性。经统计学分析,0号,5号,8号三只羊的结果有显著性意义,初步发现5条BP26和3条OMP31的16肽兼具通用性和刺激IFN-γ高水平分泌等强T细胞表位的特点。为下一步的细胞内染色确定T细胞表位和疫苗的基因工程改造提供了试验依据。

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