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首页> 中文会议>全国农业生物化学与分子生物学第十四届学术研讨会 >家蚕山梨醇脱氢酶基因启动子特性分析

家蚕山梨醇脱氢酶基因启动子特性分析

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山梨醇脱氢酶(sorbitol dehydrogenase,SDH)是山梨醇转化为糖原的关键酶,家蚕卵中山梨醇含量的变化与卵期滞育的发动、持续和停止有着密切的平行关系.家蚕有3个SDH基因,分别为BmSDH-1、BmSDH-2a和BmSDH-2b.为了研究家蚕BmSDH启动子的特性,设计特异性引物,以二化性(bivoltine,bvt)品种秋丰基因组DNA为模板,PCR扩增得到3个BmSDH约1.0Kb的启动子片段;以pGL3.0 basic质粒为载体,分别构建由BmSDH启动子片段驱动荧光素酶报告基因(luc)表达载体pGL3-BmSDH-1-bvt-1074,pGL3-BmSDH-2a-bvt-1082和pGL3-BmSDH-2b-bvt-1175;分别转染家蚕卵巢来源的BmN细胞,以转染的BmN细胞为对照,分析luc表达水平,并以此衡量BmSDH启动子片段的活性,结果显示:同样长度的BmSDH-2a启动子活性明显高于BmSDH-2b和BmSDH-1的启动子活性,分别是后者的9.7倍和21.0倍,暗示家蚕体内山梨醇脱氢酶活性主要来自BmSDH-2a的表达.为了进一步研究BmSDH-2a基因启动子的特性,分别克隆二化性品种BmSDH-2a 674 bp和355 bp的启动子片段,构建不同长度的BmSDH-2a启动子片段控制的报告质粒pGL3-BmSDH-2a-bvt-674和pGL3-BmSDH-2a-bvt-355,并与pGL3-BmSDH-2a-bvt-1082分别转染BmN细胞,结果显示:BmSDH-2a的355bp启动子活性明显高于674 bp和1082 bp的启动子,分别是它们的1.3倍和3.3倍,提示在BmSDH-2a启动子-355 bp～-674bp和-674 bp--1082 bp之间存在负调控元件.

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