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家蚕aly/ref基因的克隆及其表达蛋白在细胞中的定位

摘要

RNA和输出因子结合蛋白(RNA and export factor binding proteins,REF;又称ALY)参与 RNA的加工、输出和稳定性。本研究通过RT-PCR 克隆了家蚕aly/ref cDNA基因(Bmaly/ref),测序结果显示该基因的开放读码框为765 bp,编码254个氨基酸残基。结构分析显示BmALY/REF具有REF 家族的与RNA结合的结构域RRM,N、C 端分别且有REF-N和REF-C基序。进化分析结果显示昆虫的ALY/REF聚为一类,BmALY/REF与赤拟谷盗、意大利蜜蜂的ALY/REF较为接近。将B maly/ref基因克隆进pGS21a(+)载体进行原核表达,重组蛋白免疫小鼠,获得鼠抗BmALY/REF多抗。免疫荧光实验结果显示,BmALY/REF在细胞质和细胞核中均有分布,但主要分布在细胞核中。研究结果为进一步探讨BmALY/REF的功能奠定了基础。

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