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犬瘟热病毒重组囊膜糖蛋白(H/F)全长质粒的构建

摘要

目的:为开发新型疫苗和改良目前使用的犬瘟热病毒(CanineDistemper Virus,CDV)疫苗。rn 方法:以犬瘟热弱毒株CDV/R-20/8为模板,用Pme I单酶切pBluescript—F和pBluescript—H质粒中获得完整CDV—F和CDV—H基因片段,定向克隆到pCI—c1—EGFP质粒中,构建pCI—c1—F和pCI—c1—H质粒,正反向鉴定正确后,用Sal I和Mlu I酶分别对pCI—c1—F、pCI—c1—H、pCI—CDV—EGFP质粒进行双酶切,分别回收目的片段c1—F、c1—H片段和栽体片段pCI—CDV—,将c1—F和c1—H分别插入栽体pCI—CDV—中,通过PCR和酶切的方法进行筛选、鉴定阳性克隆。rn 结论:成功构建重组双囊膜糖蛋白全长质粒,分别命名为pCI—CDV—F和pCI—CDV—H,为下一步重组犬瘟热病毒的拯救及免疫原性分析奠定基础。

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