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细胞因子与CpG-ODN隐孢子虫CP15核酸疫苗的佐剂效应研究

摘要

为观察细胞因子和CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)对隐孢子虫核酸疫苗的免疫佐剂效应,将牛IL-18、IFN-γ单独或和CpG-OND序列组合,与隐孢子虫鼠基因型(Cryptosporidium mousegenotype)子孢子表面蛋白CPl5基因串联并克隆到真核载体pVAX-1中,构建了4个核酸疫苗,加上pVAX1-CP15和含CpG-OND的重组质粒pVAX1-C-CP15,分别免疫BALB/c小鼠,检测其诱导的体液和细胞免疫水平,观察对隐孢子虫鼠基因型感染的免疫保护效果。结果显示,6个核酸疫苗免疫BALB/c小鼠后,小鼠血清特异性抗体IgG滴度随免疫次数增加而升高,极显著高于对照组(P<0.01)。CD4+和CD8+T淋巴细胞百分率、T淋巴细胞增殖反应、细胞因子IL-18和IFN-γ的分泌水平均显著升高,其中,串联有分子免疫佐剂的核酸疫苗免疫组小鼠上述各项指标均显著高于不含分子佐剂的核酸疫苗组(P<0.05);双分子佐剂组与单分子佐剂组相比能诱导小鼠产生更强的体液和细胞免疫反应(P<0.05)。感染小鼠粪便中卵囊的realtime PCR检测显示,与对照组相比,试验组小鼠隐孢子虫卵囊首次排出时间延后、持续时间缩短、排出的总卵囊量极显著减少(P<0.01),减卵率达到87%~100%,其中串联有分子佐剂疫苗组小鼠的减卵率极显著高于不含佐剂疫苗组(P<0.01);串联有双分子佐剂疫苗组小鼠的减卵率更高达100%,极显著高于单分子佐剂疫苗组(P<0.01)。表明上述3种分子佐剂与隐孢子虫CP15抗原基因串联后制备的核酸疫苗免疫小鼠后,诱导产生了良好的体液和细胞免疫反应,对小鼠隐孢子虫人工感染具有良好的保护效果,两种分子佐剂的免疫增强效果又好于单种分子佐剂的作用。

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