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首页> 外文会议>Conference on Single Molecule Spectroscopy and Imaging; 20080119-21; San Jose,CA(US) >Recent Advances in Time-Correlated Single-Photon Counting
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Recent Advances in Time-Correlated Single-Photon Counting

机译：时间相关的单光子计数的最新进展

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We report about the time-resolved confocal fluorescence microscope MicroTime 200, which is completely based on TTTR format data acquisition and enables to perform very advanced FCS, FRET and FLIM analysis such as Fluorescence Lifetime Correlation Spectroscopy (FLCS) or Two Focus FCS (2fFCS). FLCS is a fundamental improvement of standard FCS overcoming many of its inherent limitations. The basic idea of FLCS is a weighting of the detected photons based on the additional picosecond timing information (TCSPC start-stop time) when using pulsed laser excitation. 2fFCS goes even further, combining Pulsed Interleaved Excitation (PIE) with a time-gated FCS analysis. The basic implementation of 2fFCS uses two synchronized but interleaved pulsed lasers of the same wavelength but of different polarisation to generate two close by excitation foci in a predetermined distance acting as a submicron ruler. In this case it it no longer necessary to have prior knowledge about the size and shape of the confocal volume. Maintaining the information about the photon's origin, the dual focus data allows a precise calculation of absolute diffusion coefficients.
机译：我们报告了时间分辨共聚焦荧光显微镜MicroTime 200，它完全基于TTTR格式的数据采集，能够执行非常先进的FCS，FRET和FLIM分析，例如荧光寿命相关光谱（FLCS）或两焦点FCS（2fFCS） 。 FLCS是对标准FCS的根本改进，克服了许多固有限制。 FLCS的基本思想是在使用脉冲激光激发时，基于附加的皮秒定时信息（TCSPC开始-停止时间）对检测到的光子进行加权。 2fFCS进一步发展，将脉冲交错激励（PIE）与时间门控FCS分析相结合。 2fFCS的基本实现方式是使用两个波长相同但偏振不同的同步但交错的脉冲激光，以预定的距离产生两个近距离的激发焦点，用作亚微米标尺。在这种情况下，不再需要具有共焦体积的大小和形状的先验知识。通过保留有关光子起源的信息，双焦点数据可以精确计算绝对扩散系数。

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