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高圧技術を利用したCARD-FISH法適用範囲拡大のための細胞壁処理

机译：细胞壁处理扩大了使用高压技术的CARD-FISH方法的应用范围

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FISH (Fluorescence in situ hybridization)法は微生物のrRNAに特異的に結合する蛍光標識DNAプローブを利用し、標的微生物のみを蛍光顕微鏡下で可視化する検出方法である。 FISH法の改良法として提案されたCARD-FISH (Catalyzed reporter deposition-FISH)法は、西洋わさびペルォキシダーゼ（HRP)標識DNAプローブを利用することで、通常のFISH法の20倍以上の高感度な検出が可能であり、貧栄養の環境に生息しているようなrRNA含量の少ない微生物も検出可能である。海洋を含む地球上のほとhどは貧栄養の環境であることから、CARD-FISH法は自然環境中に生息する微生物をin situで検出する上で高い利点がある。しかし、DNAプローブに標識されているHRPは巨大な分子量を有するため、HRP標識DNAプローブを効率的に微生物細胞内へ浸透させることは困難である。これまでに細胞壁処理として細胞壁溶解酵素であるリゾチーム(LZ)やアクロモぺプチダーゼ（AP)等が利用されてきたが、細胞壁の構成成分の違いから、これらの酵素が作用しない微生物も存在する。広範な微生物にCARD-FISH法を適用するためには、HRP標識プローブの浸透性向上を目的とした新しい細胞壁処理が必要不可欠である。
机译：FISH（荧光原位杂交）方法是一种使用荧光标记的DNA探针的检测方法，该探针与微生物的rRNA特异性结合，并且在荧光显微镜下只能看到目标微生物。作为FISH方法的一种改进方法，提出了CARD-FISH（催化记者沉积FISH）方法，该方法使用辣根过氧化物酶（HRP）标记的DNA探针检测的灵敏度是普通FISH方法的20倍以上。可以检测到rRNA含量低的微生物，例如生活在贫营养环境中的微生物。由于包括海洋在内的大部分地球都是贫营养环境，因此CARD-FISH方法在检测原位自然环境中的微生物方面具有很大的优势。然而，由于用DNA探针标记的HRP具有巨大的分子量，所以难以有效地将HRP标记的DNA探针渗透到微生物细胞中。迄今为止，已经将溶菌酶（LZ）和染色体肽酶（AP）作为细胞壁裂解酶，用于细胞壁处理，但是由于细胞壁成分的差异，在某些微生物中这些酶不起作用。为了将CARD-FISH方法应用于多种微生物，旨在提高HRP标记探针的通透性的新细胞壁处理是必不可少的。

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