成人骨髓间充质干细胞和脱细胞猪主动脉瓣构建组织工程化人工心脏瓣膜的实验室研究

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目的：本研究通过体外分离和纯化成人骨髓间充质干细胞，并在体外定向诱导分化为内皮样细胞和成纤维样细胞，研究其增殖和生长的特性，探讨为构建组织工程化心脏瓣膜提供种子细胞的可能性。方法：1、成人骨髓间充质干细胞的分离、培养和扩增：采用密度梯度离心结合贴壁的方法，提取骨髓单个核细胞进行体外培养扩增，收集传代细胞行流式细胞仪检测细胞表型，并绘制培养细胞的生长曲线。2、骨髓间充质干细胞向内皮样细胞和成纤维样细胞的诱导分化：分别用含10ng/ml VEGF和5ng/ml bFGF的培养液诱导细胞分化，对所诱导的细胞进行形态学、免疫组化染色、细胞表型及功能的鉴定。结果： 1.通过密度梯度离心结合贴壁的方法，可以获取增殖活跃的骨髓间充质干细胞，该细胞高表达CD105、CD44、CD29，原代培养曲线显示第7-10天为对数增长期，传代培养曲线显示第4-6天为对数增长期，传代细胞多于P10后开始出现衰老现象。2.经VEGF诱导的细胞具有内皮样细胞形态特点，vWF染色阳性，细胞上清液内NO浓度为166.58±1.91 umol/109cel/L。3.经bFGF诱导的细胞具有成纤维样细胞形态特点，SMA染色阳性，高表达CD105，不表达CD34。结论 1.利用密度梯度离心结合贴壁的方法，可以提取足够量、高纯度、未分化、能大量增殖的骨髓间充质干细胞，能够满足构建TEHV的需要。2.骨髓间充质干细胞可以在体外诱导分化成为内皮样细胞和成纤维样细胞，并能做为构建TEHV的种子细胞。

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作者
马浩;
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作者单位

北京协和医学院;

中国医学科学院;

清华大学医学部;

中国协和医科大学(北京协和医学院);

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授予单位北京协和医学院;中国医学科学院;清华大学医学部;中国协和医科大学(北京协和医学院);
学科心外科
授予学位博士
导师姓名李泽坚,苗齐;
年度 2008
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类心脏血管系;细胞、组织培养技术;
关键词
人工心脏; 心脏瓣膜; 种子细胞; 细胞培养;

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