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首都师范大学学位论文原创性声明及授权使用声明
综述
一、小麦贮藏蛋白的分类
二、小麦醇溶蛋白的研究方法
1.酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)
2.反相高效液相色谱(RP-HPLC)
3.高效毛细管电泳(HPCE)
4.双向凝胶电泳(Two-dimensional Gel Electrophoresis，2-DE)
5.质谱(Mass Spectrometry,MS)技术
三、小麦醇溶蛋白的组成及分子遗传
1.醇溶蛋白的组成及分子结构
2.醇溶蛋白的基因定位及遗传多态性
四、小麦醇溶蛋白与品质的关系
五、分子生物学方法在醇溶蛋白研究上的应用
1.醇溶蛋白的基因克隆
2.醇溶蛋白基因的体外表达
3.对小麦醇溶蛋白基因克隆方法的探索与展望
六、本研究的基本思路和目标
1.普通小麦及其近缘种α-醇溶蛋白的分离与鉴定
2.普通小麦及其近缘种α-醇溶蛋白编码基因的克隆与序列分析
3.克隆基因的原核表达
材料与方法
一、实验材料
二、α-醇溶蛋白的分离与鉴定
1.反向高效液相色谱(RP-HPLC)分析
2.基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析
三、α-醇溶蛋白编码基因的分子克隆
1.仪器设备
2.小麦基因组DNA提取
3.灌浆期小麦总RNA的提取及cDNA的合成
4.PCR扩增
5.T-Vector基因克隆
6.序列比较、同源性分析
四、α-醇溶蛋白编码基因在大肠杆菌中的体外表达
1.表达载体和菌株
2.α-醇溶蛋白编码基因表达载体的构建
3.α-醇溶蛋白编码基因的E coli蛋白表达、提取及SDS-PAGE检测
结果分析
一、α-醇溶蛋白的反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析
二、α-醇溶蛋白的质谱(MALDI-TOF-MS)分析
三、粗山羊草α-醇溶蛋白编码基因的PCR扩增和克隆
四、α-醇溶蛋白基因及蛋白序列特征分析
五、克隆基因与其它已知基因编码的蛋白序列比较分析
六、克隆基因的染色体定位
七、醇溶蛋白氨基酸序列的聚类分析
八、α-醇溶蛋白的编码基因在大肠杆菌中的体外表达
1.α-醇溶蛋白编码基因原核表达载体的构建
2.α-醇溶蛋白编码基因原核表达载体的蛋白表达
讨论
一、α-醇溶蛋白的RP-HPLC和MS分析
二、α-醇溶蛋白基因的分子克隆
三、α-醇溶蛋白基因结构特点及染色体定位
四、醇溶蛋白基因的同源性分析
五、α-醇溶蛋白编码基因的原核表达
结论
参考文献
作者简历
致谢
