白斑综合症病毒(WSSV)进入造血组织细胞的途径及红螯螯虾网格蛋白轻链的克隆及制备抗体的检测

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对虾白斑综合症病毒（White spot syndrome virus，WSSV）属线形病毒科(Nimaviridae)白斑病毒属（Whispovirus），是一种环状双链 DNA病毒，能感染对虾、螯虾等各种虾类。该病毒宿主范围广，传染力强，致死率高，是养殖虾类的主要病原，但目前该病毒的对宿主细胞的侵染机制仍不清楚。本文通过不同的内吞抑制剂及内吞标志物，对 WSSV进入造血组织细胞的途径进行了分析。此外，对红螯螯虾（Cherax quadricarinatus）造血组织细胞的网格蛋白轻链cDNA进行克隆，并制备得到了特异性的抗体。本研究有助于进一步对 WSSV的感染机制进行深入地研究，并对虾养殖业中 WSSV病害的防治提供了有益的借鉴和科学的依据。
　　（1）借助相关的内吞途径抑制剂及内吞标志物，研究WSSV进入造血组织细胞的相关内吞途径。结果表明，网格蛋白抑制剂Chlorpromazine（CPZ）能有效地抑制WSSV侵染，并且与转铁蛋白及网格蛋白共定位，说明WSSV是通过网格蛋白介导的内吞途径进入造血组织细胞。此外，在内吞的过程中，需要dynamin和细胞膜上胆固醇的参与，并且需要经过酸化。
　　（2）克隆得到红螯螯虾网格蛋白轻链的 cDNA全长，并将其命名为 CqCLC（Genbank登录号为KR075008）。进化树分析表明，其与黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）的网格蛋白轻链进化距离较近。此外，在其蛋白序列中选择抗原性较好的片段合成多肽，并以此制备单克隆抗体，而后经免疫荧光和Western blot检测从中筛选出具有特异性的抗体。

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作者
黄家骏;
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作者单位

国家海洋局第三海洋研究所;

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授予单位国家海洋局第三海洋研究所;
学科海洋生物学
授予学位硕士
导师姓名杨丰,李钫;
年度 2015
页码
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类 S945.46;
关键词
内吞机制; 网格蛋白轻链; 对虾白斑综合症病毒; 单克隆抗体;

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