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三个紫花苜蓿品种耐盐突变体筛选及其再生植株生理特性研究

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前言

1文献综述

1.1体细胞无性系变异研究进展

1.1.1体细胞无性系变异在育种上的应用

1.1.2体细胞无性系变异体的产生

1.1.3体细胞无性系变异在紫花苜蓿上的应用

1.1.4存在的问题

1.2植物耐盐变异体离体筛选研究进展

1.2.1耐盐变异体的筛选

1.2.2耐盐愈伤组织变异系的耐盐稳定性

1.2.3耐盐细胞系的植株再生及其耐盐性状的稳定性

1.2.4耐盐变异体的检测

1.2.5筛选耐盐变异体研究中存在的问题和展望

2研究材料与方法

2.1研究材料

2.2研究方法

2.2.1三个紫花苜蓿品种再生体系的建立

2.2.2耐盐变异体的筛选

2.2.3盐胁迫对种子萌发、愈伤组织诱导、生长的影响

2.2.4耐盐变异植株的生理生化特性检测

2.2.5数据统计

3结果与分析

3.1三个紫花苜蓿品种再生体系的建立

3.1.1愈伤组织的诱导

3.1.2分化培养

3.1.3生根培养

3.1.4移栽

3.2耐盐变异体的筛选

3.2.1不同筛选方法愈伤组织存活率

3.2.2耐盐愈伤组织变异体的稳定性

3.2.3耐盐愈伤组织变异体的再生

3.3盐胁迫对种子萌发、愈伤组织诱导、生长的影响

3.3.1种子萌发耐盐性实验

3.3.2不同盐浓度对愈伤组织的影响

3.4耐盐变异植株的生理生化特性

3.4.1叶绿素含量

3.4.2丙二醛(MDA)含量

3.4.3脯氨酸(PRO)含量

3.4.4植物根系活力

3.4.5过氧化物酶(POD)活性

3.4.6多酚氧化酶(PPO)活性

3.4.7超氧化物歧化酶(SOD)活性

4结论与讨论

4.1紫花苜蓿再生体系的建立

4.1.1不同基冈型的苜蓿植株再生能力

4.1.2苜蓿植株不同外植体的再生能力

4.1.3不同外源激素对苜蓿植株再生能力的影响

4.1.4胚状体形成与再生能力

4.2紫花苜蓿耐盐性鉴定

4.2.1盐胁迫下三个紫花苜蓿品种的萌发

4.2.2不同盐浓度对三个紫花苜蓿品种愈伤组织的影响

4.3紫花苜蓿耐盐变异体的筛选

4.3.1愈伤组织的处理

4.3.2耐盐筛选方法

4.4紫花苜蓿耐盐变异植株的生理生化特性

4.4.1叶绿素含量

4.4.2丙二醛(MDA)含量

4.4.3脯氨酸(PRO)含量

4.4.4植物根系活力

4.4.5三种氧化还原酶活力

4.5展望

参考文献

致谢

个人简历

导师简介

附图

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摘要

紫花苜蓿为生长面积最大,利用价值最高的优质牧草。如何进一步提高其耐盐碱特性,扩大其种植面积,是当前苜蓿生产面临的重要研究课题。以三个南方紫花苜蓿品种Victoria、Millennium和CW787为材料,利用不同浓度Nacl溶液对其种子和愈伤组织进行盐胁迫处理,并以其不同部位为外植体,诱导胚性愈伤组织;然后用Nacl做选择剂,采用一步正筛选法和多步正筛选法,筛选出抗盐愈伤组织变异系,再生出耐盐植株。再生植株小苗移栽成活后,进行浇盐处理,比较耐盐系和同步培养的对照系的几项生理指标。主要研究结果如下: 1、三个紫花苜蓿品种的发芽率随Nacl浓度的升高显著下降;随着培养基中Nacl浓度的增大,愈伤组织诱导率、愈伤组织相对增长量、愈伤组织存活率、再生率均显著下降。 2、两种筛选方法筛选出的愈伤组织回接到无盐培养基中继代两个周期,然后转入含盐培养基中,愈伤组织生长良好,说明其耐盐性是稳定的。 3、筛选出Millennium耐盐1.0%植株5株,Victoria耐盐1.0%植株3株,CW787耐盐1.0%植株1株。 4、对耐盐系和对照系再生植株的生理特性分析表明,随着盐浓度的提高,叶绿素含量及根系活力呈先升后降趋势,耐盐系普遍高于对照系;丙二醛含量均呈先降后升趋势,且耐盐系的丙二醛含量低于同等胁迫条件下的对照系;耐盐系和对照系在无盐胁迫下,脯氨酸含量基本相同,随着盐浓度的增加,均积累更多的脯氨酸,耐盐系的积累能力明显高于对照系;耐盐系和对照系的过氧化物酶、多酚氧化酶、超氧化物歧化酶活性基本呈先升后降趋势,且活性均为耐盐系显著高于对照系;变化曲线中多以0.8%的盐浓度为转折点。 5、在盐胁迫条件下,三个品种中,Millennium的耐盐系积累脯氨酸能力最强,随着盐浓度的增加,超氧化物歧化酶活性呈稳定上升趋势,因此认为Millennium耐盐变异系是最耐盐的。

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