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烟草中降亚硝酸盐菌B.megaterium MPF-906的分离鉴定及应用

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第一章绪论

第二章高效降解亚硝酸盐菌株B.megaterium MPF-906的分离及鉴定

第三章B.megaterium MPF-906降解亚硝酸盐的条件优化

第四章B.megaterium MPF-906在烟叶人工发酵中的应用

第五章B.megaterium MPF-906在烟草薄片工艺中的应用

第六章B.megaterium MPF-906的产酶条件优化

第七章结论与建议

参考文献

致谢

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摘要

烟草特有亚硝酸胺(TSNA)是烟草中的强烈致癌物质。亚硝酸盐和TSNA的形成有显著的相关性，是TSNA形成的重要前体物。本论文筛选和鉴定了一株高效降解亚硝酸盐的巨大芽孢杆菌(B.megateriumMPF-906，CGMCCNo.1627)，将其应用在烟草人工发酵和烟草薄片工艺中。另外，还优化了产亚硝酸盐还原酶的条件。主要内容和结论如下： 从烟土中筛选出一株高效降解亚硝酸盐的菌株，根据培养特征、生理生化特征分析和16SrRNA序列分析，鉴定为巨大芽孢杆菌(B.megateriumMPF-906，CGMCCNo.1627)。液体发酵降解亚硝酸盐的优化培养基为：葡萄糖1.5％，蛋白胨0.15％，牛肉膏0.15％，K2HPO40.135％，KH2PO40.07％，NaClO.1％；无机盐：MgSO4·7H20.02％，MnSO4·H2O0.001％，CaCl2·2H2O0.002％；NaNO20.0138％。发酵条件：通气条件(摇床转速)120r/min，接种量4％，初始pH7.0，30℃发酵24小时，99％的NaNO2降解。 接种B.megateriumMPF-9061O8个/克烟丝发酵，在水分21％、温度30℃、相对湿度65％条件下发酵10天，烟丝中的亚硝酸盐含量从10.2μg/g降到6.4μg/g，烟碱从2.04％降到1.95％，硝酸盐从4.8mg/g降到3.6mg/g，还原糖从1.1％降到1.O％，总氮从3.17％降到3.06％；B.megateriumMPF-906和降烟碱菌ArthrobacternicotinovoransZ3的混合菌剂1∶1以菌数2×108个/克烟丝接种发酵10天，亚硝酸盐含量从10.2μg/g降到6.38μg/g，烟碱从2.04％降到1.80％，硝酸盐从4.8mg/g降到3.4mg/g，还原糖从1.1％降到0.95％，总氮从3.17％降到2.95％。 在烟草薄片提取液中接入6％(VN)的B.megateriumMPF-906，30℃、120r/min通气培养24小时，亚硝酸盐含量下降了98％。在提取液中加入6％的B.megateriumMPF-906和6％的ArthrobacternicotinovoransZ3，30℃、120r/min培养24小时，烟碱下降了52.4％，亚硝酸盐含量下降了95％。 优化后的产亚硝酸盐还原酶发酵培养基为：葡萄糖1.5％，牛肉膏O.2％，(NH4)2SO40.15％，K2HPO40.135％，KH2PO40.07％，NaClO.1％；无机盐：MgSO4·7H2O0.04％，MnSO4·H2O0.001％，CaCl2·2H2O0.002％，NaNO20.0138％。发酵条件：通气条件(摇床转速)160r/min，接种量4％，初始pH6.5，30℃发酵20小时。比活由最初的12.5U/mg提高到17.2U/mg，提高了37.6％。以5％的酶量加到烟草薄片提取液中，30℃、12小时亚硝酸盐含量减少61％。

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