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转基因棉籽培养料栽培平菇过程中Bt蛋白、转入DNA降解及对平菇、平菇害虫的影响

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第一章前言

1.1转基因棉花及其生态安全问题

1.2 Bt蛋白的测定及在土壤中的降解

1.3 DNA片段的检测及在土壤中的降解

1.4转Bt基因植物对土壤微生物的影响

1.5转Bt基因植物对非标靶节肢动物的直接影响

1.5.1益虫

1.5.2天敌

1.5.3其他昆虫

1.5.4食用菌害虫

1.6转基因植物对真核生物细胞内DNA的影响

1.7本研究的目的意义与技术路线

1.7.1目的意义

1.7.2技术路线

第二章转Bt基因棉棉籽组织中Bt蛋白测定及降解

2.1材料与方法

2.1.1棉籽

2.1.2主要试剂

2.1.3主要仪器

2.1.4棉籽、棉籽仁、棉籽壳贮存

2.1.5提取液与稀释液制备

2.1.6 Bt蛋白测定

2.2结果与分析

2.2.1 Envirologix试剂盒测定棉籽仁中Bt蛋白含量

2.2.2 Envirologix试剂盒和Agdia试剂盒测得的净吸光值的线性关系

2.2.3 Agdia试剂盒测得的净吸光值与Bt蛋白浓度的线性关系

2.2.4棉籽、棉籽仁、棉籽壳贮存过程中Bt蛋白的变化

2.3讨论

第三章培养料中棉籽量和转Bt基因棉棉籽对平菇生长的影响

3.1材料与方法

3.1.1平菇菌种

3.1.2棉籽

3.1.3平菇栽培

3.2结果与分析

3.2.1培养料中棉籽含量对平菇菌丝生长的影响

3.2.2培养料中棉籽含量对平菇子实体形成的影响

3.2.3转基因棉籽对平菇菌丝体生长的影响

3.3讨论

第四章转基因棉籽成分对培养液中平菇菌丝体生长的影响

4.1材料与方法

4.1.1平菇菌种

4.1.2棉籽

4.1.3主要试剂

4.1.4主要仪器

4.1.5 Bt蛋白培养液培养菌丝体

4.1.6棉籽成分培养液培养菌丝体

4.1.7数据统计分析

4.2结果与分析

4.2.1 Bt蛋白对平菇菌丝体生长的影响

4.2.2棉籽成分含量对平菇菌丝体生长的影响

4.2.3不同棉籽品种对平菇菌丝体生长的影响

4.2.4中16、中30棉籽成分对不同品种平菇菌丝体的影响

4.3讨论

第五章转Bt基因棉棉籽培养平菇过程中Bt蛋白的降解

5.1材料与方法

5.1.1平菇菌种

5.1.2棉籽

5.1.3主要试剂

5.1.4主要仪器

5.1.5平菇栽培与取样

5.1.6菌丝体培养与取样

5.1.7 Bt蛋白测定

5.2结果

5.2.1含3%33B棉籽的培养料中Bt蛋白的降解

5.2.2含3%99B棉籽的培养料中Bt蛋白的降解

5.2.3含20%33B棉籽的培养料中Bt蛋白的降解

5.2.4含20%99B棉籽的培养料中Bt蛋白的降解

5.2.5培养液中Bt蛋白的降解

5.3讨论

第六章转Bt基因棉棉籽培养平菇过程中有关DNA的降解

6.1材料与方法

6.1.1平菇菌种

6.1.2棉籽

6.1.3主要试剂

6.1.4主要仪器

6.1.5平菇栽培与取样

6.1.6核酸培养液培养的菌丝体

6.1.7利用Promega试剂盒提取DNA

6.1.8 nest-PCR

6.2结果与分析

6.3讨论

第七章转基因棉籽对平菇酯酶同功酶和过氧化物酶同工酶的影响

7.1材料与方法

7.1.1平菇菌种

7.1.2棉籽

7.1.3主要试剂及配制

7.1.4主要仪器

7.1.5平菇栽培

7.1.6菌丝体培养

7.1.7蛋白质粗提液的制备

7.1.8同工酶电泳与染色

7.2结果与分析

7.2.1平菇子实体同工酶电泳

7.2.2平菇菌丝体同工酶电泳

7.2.3不同品种平菇菌丝体同工酶电泳

7.3讨论

第八章平菇组织中和有关外源基因同源的DNA片段的发现及来源探索

8.1材料与方法

8.1.1平菇菌种

8.1.2棉籽

8.1.3主要试剂

8.1.4主要仪器

8.1.5子实体培养与取样

8.1.6菌丝体培养与取样

8.1.7样品制备

8.1.8 PCR检测与测序

8.2结果与分析

8.2.1不含棉籽成分的培养液培养的平菇菌丝体

8.2.2含非转基因棉籽的培养料栽培的平菇子实体

8.2.3含转基因棉籽成分的培养液培养的平菇菌丝体

8.2.4含转基因棉籽的培养料栽培的平菇子实体

8.2.5测序结果

8.3讨论

第九章转Bt基因棉棉籽成分培养的平菇子实体与菌丝体DNA多态性分析

9.1材料与方法

9.1.1平菇菌种

9.1.2棉籽

9.1.3主要试剂

9.1.4主要仪器

9.1.5子实体培养

9.1.6菌丝体培养

9.1.7样品制备

9.1.8 RAPD方法

9.2结果与分析

9.2.1含Bt棉棉籽的培养料栽培的平菇子实体

9.2.2斜面上连续传代(10代)的平菇菌丝体

9.2.3培养液中连续转代(9代)的平菇菌丝体

9.3讨论

第十章含转基因棉籽的培养料对3种平菇害虫的影响

10.1材料与方法

10.1.1平菇菌种

10.1.2棉籽

10.1.3培养料配制

10.1.4菇棚感虫与虫量调查

10.1.5含不同品种棉籽的培养料饲养平菇厉眼菌蚊与死亡率调查

10.1.6数据统计分析

10.2结果分析

10.2.1对平菇厉眼菌蚊、粪蚊和蚤蝇发生量的影响

10.2.2对平菇厉眼菌蚊死亡率的影响

10.3讨论

第十一章结论

参考文献

致谢

作者简介

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摘要

本研究利用转基因棉籽成分配制培养基培养平菇,了解平菇培养过程中Bt蛋白和DNA的降解情况,了解转基因棉籽成分对平菇生长的影响,了解转基因棉籽成分对平菇酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶的影响,探索转基因棉籽成分对平菇细胞内DNA的影响,探索转基因棉籽成分对平菇主要害虫的影响,从而探索转基因棉籽在平菇栽培生态系统中的安全问题。

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