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透明颤菌血红蛋白基因和λ噬菌体裂解基因在产聚羟基烷酸重组大肠杆菌中作用的研究

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第一章引言

一PHA研究进展

二透明颤菌血红蛋白及其基因的研究进展

第二章产PHB的vhb基因整合型菌株的构建

一前言

二材料和方法

二结果与分析

第三章产PHB的重组大肠杆菌的发酵研究

一前言

二材料和方法

三结果与分析

第四章产PHB的vhb和SRRz共整合型工程菌的构建

一前言

二材料与方法

三结果与分析

第五章总结与讨论

一总结

二讨论

参考文献

致谢

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摘要

由于透明颤菌血红蛋白基因(vhb)在质粒上高拷贝的表达,降低了PHB的产量.故该文将vhb基因插入到E.coliHMSl74的染色体上,构建成为vhb基因整合菌HV,并用CO结合实验证实了血红蛋白的表达.在摇瓶中培养,发现在培养前期,HV的生长与无vhb基因的对照菌E.coliHMS174相差不多,到培养后期时,vhb基因整合菌HV才略有生长优势.将带有phb操纵子和质粒稳定分配基因parDE的质粒pTZ101引入vhb整合菌中,构建成为产PHB的vhb整合菌HV(pTZ101).摇瓶中培养40小时,OD600和PHB的含量均比无vhb基因的对照菌E.coli HMS174(pTZ 101)高.5-L发酵罐发酵HV(pTZ101),OD600为50,PHB占干重的47.3﹪:发酵E.coli HMS174(pTZ101),OD600为172,PHB占干重的62.4﹪.利用PCR扩增得到噬菌体裂解基因的启动子和结构基因(SRRz),连接在转座子miniTn5上,构建成为质粒MVPS,用于将vhb基因和SRRz基因共同插入到E.coli HMS174的染色体上.对E.coliCC118/λpir(MVPS)进行裂解实验,但是没有成功.

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