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茶树精油抗菌活性及其安全性研究

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摘要

第一章 引言

1.1 茶树油的概述

1.2 茶树油的提取

1.3 茶树油的化学成分及其含量测定

1.4 茶树油的药理作用

1.4.1 抗菌作用

1.4.2 抗病毒作用

1.4.3 抗炎活性

1.4.4 抗肿瘤活性

1.5 茶树油的应用

1.6 茶树油的毒性

1.7 研究的目的和意义

第二章 茶树油质量标准的测定

2.1 材料

2.1.1 主要仪器

2.1.2 主要试剂

2.2 方法

2.2.1 茶树油理化性质的测定

2.2.2 茶树油的薄层色谱鉴定

2.3.3 茶树油GC-MS法定量分析

2.4 讨论

第三章 茶树油抗菌活性的研究

3.1 材料

3.1.1 主要仪器

3.1.2 主要菌株及试剂

3.2 方法

3.2.1 菌种活化及活菌的培养计数

3.2.2 牛津杯抑菌圈试验

3.2.3 MIC的测定

3.2.4 抑菌性能测定

3.2.5 中和剂鉴定试验

3.2.6 悬液定量杀灭试验

3.2.7 数据的统计学分析

3.3 结果

3.3.1 牛津杯抑菌圈试验结果

3.3.2 MIC测定试验结果

3.3.3 抑菌性能测定试验结果

3.3.4 中和剂鉴定试验结果

3.3.5 悬液定量杀灭试验结果

3.4 讨论

第四章 茶树油的局部刺激性和致敏性试验

4.1 材料

4.1.1 主要仪器及试剂

4.1.2 实验动物

4.2 方法

4.2.1 皮肤刺激性试验

4.2.2 急性眼刺激试验

4.2.3 局部致敏性试验

4.3 结果

4.3.1 皮肤刺激性试验结果

4.3.2 急性眼刺激性试验结果

4.3.3 局部致敏性试验结果

4.4 讨论

第五章 茶树油的急性经口毒性试验

5.1 材料及仪器

5.1.1 试验动物

5.1.2 溶液配制

5.2 方法

5.2.1 急性经口毒性预试验

5.2.2 急性经口毒性正式试验

5.3 临床观察

5.3.1 病理学组织学观察

5.4 结果

5.4.1 预试验结果

5.4.2 正式试验结果

5.5 讨论

第六章 茶树油的亚慢性毒性试验

6.1 材料

6.1.1 试验仪器和材料

6.1.2 溶液的配制

6.1.3 试验动物

6.2 方法

6.3 观察指标

6.3.1 临床检查

6.3.2 血液学检查

6.3.3 血液生化指标检查

6.3.4 脏器重量检查

6.3.5 病理组织学检查

6.4 统计学分析

6.5 结果

6.5.1 临床检查结果

6.5.2 大鼠体重变化

6.5.3 大鼠脏器系数的变化

6.5.4 血常规检测结果

6.5.5 血清生化检测结果

6.5.6 病理组织学观察

6.6 讨论

第七章 全文结论

参考文献

附录

致谢

作者简历

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摘要

茶树油是近年来发展较快的一种精油,具有广谱的抗菌活性,在国外已被研发成多种类型的产品,如防腐剂、抗菌剂和芳香剂。我国对茶树油的抗菌作用及机理还没有充分了解,其产品的研发相对滞后,为了推动茶树油在我国的开发利用,本研究对茶树油开展质量标准测定、抗菌活性研究、局部刺激性和致敏性、急性经口毒性以及亚慢性毒性作用的研究,结果如下:
  (1)茶树油质量标准的测定:茶树油的相对密度为0.9011、折光率为1.4815、旋光度为+8.83,pH为5.46;采用薄层色谱法对茶树油的特征组分进行定性测定;采用GC-MS分析方法测定特茶树油征组分的含量,测得1,8-桉叶素含量为1.4%,4-松油烯含量为39.25%。
  (2)茶树油抑菌试验:茶树油对5种供试菌抑菌效果均属于中度敏感。测得大肠埃希菌和白色葡萄球菌的MIC为1.0%,金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、绿脓杆菌的MIC分别为1.2%、1.4%、2.0%。中和剂鉴定试验,中和剂配方为:4%Tween-80+1.0%卵磷脂+2.0%甘氨酸+PBS,能有效中和茶树油对试验菌残留作用。悬液定量杀灭试验,2.0%的茶树油对绿脓杆菌、大肠埃希菌的杀灭时间20min;4.0%的茶树油对金黄色葡萄球菌的杀灭时间60min;茶树油对白色念珠菌和白色葡萄球菌的杀灭浓度为8.0%,作用时间分别为60min和40min。
  (3)一次完整皮肤刺激试验:4只白兔均未出现水肿和红斑表现,茶树油对白兔皮肤无刺激性。一次破损皮肤刺激试验:中低剂量组对白兔皮肤无刺激性;高剂量组对白兔的皮肤有轻度刺激。多次完整皮肤刺激试验:4只白兔均未出现红斑表现,出现轻度水肿,中低剂量组无刺激性,高剂量组有轻度刺激。急性眼刺激试验:茶树油对白兔角膜和虹膜均没有刺激性,对结膜有轻度刺激,会造成结膜充血,但症状在48h后恢复,属于无刺激性。局部致敏性试验:试验组均未出现皮肤红斑和水肿的情况,皮肤反应评分为0,致敏率为0。
  (4)茶树油的急性经口毒性试验:采用BLiss法测得茶树油的LD50为2184.2mg/kg,95%可信限为1940mg/kg~2439.5mg/kg,茶树油为低毒物质。茶树油的亚慢性毒性试验:ALT、AST和ALP含量同时升高,TP含量降低,说明大鼠存在一定的肝脏和肾脏损伤。试验组MCHC、PDW、P-LCR、MPV、TBIL显著性降低(P<0.05),说明大鼠出现了贫血的症状;病理切片可见大鼠肝脏和肾脏出现水肿,脾脏有不同程度的淤血;高剂量组大鼠的脾脏的脏器系数显著性升高。综上所述,高浓度的茶树油对大鼠的肝脏、肾脏和脾脏会产生一定的毒性,对心脏和肺的毒性作用不明显。
  本研究证实,茶树油具有显著的抗菌活性、低毒安全及无刺激性等优点,具有广阔的市场研发前景。

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